Amoniaco (NH3) 1x60 ml / 8x5 ml

Amoniaco (NH3) 1×60 ml / 8×5 ml

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Determinación cuantitativa de Amoniaco. IVD.
Conservar a 2-8ºC.

USO PREVISTO

Para determinación cuantitativa in vitro de Amoniaco en plasma.

PRINCIPIO DEL MÉTODO

El amoniaco se combina con α-cetoglutarato y NADPH en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para producir glutamato y NADP+. El correspondiente descenso de absorbancia a 340 nm es porporcional a la concentración de amoniaco en plasma.

α-cetoglutarato + NH3+ NADPH GLDH→ glutamato+ NADP+

SIGNIFICADO CLÍNICO

La principal fuente de difusión de amoníaco es el tracto gastrointestinal. En condiciones normales, el amoniaco es metabolizado a urea por las enzimas del hígado. Varias enfermedades, tanto congénitas como adquiridas, causan incrementos de amoníaco (hiperamonemia). La causa principal de hiperamonemia en los bebés es la deficiencia hereditaria de enzimas del ciclo de la urea. Las enfermedades de hiperamonemia adquiridas son causadas por enfermedad hepática, insuficiencia renal, y síndorme de Reye. Un nivel alto de amoníaco es tóxico para el sistema nervioso central.

REACTIVOS

R1a
Reactivo
NADPH
α-cetoglutarato
0,26 mmol/L
3,88 mmol/L
R1b
Tampón
Trietanolamina pH 8,6
0,15 mol/L
R2
GLDH
≥1200 U/mL
Calibrador
La concentración del estándar de amoniaco es la que viene indicada en la etiqueta del vial.
Opcional
Control de Amoniaco 4×2 mL Ref. 1002240.

PRECAUCIONES

R1b: H315-Provoca irritación cutánea. H319-Provoca irritación ocular grave.
Seguir los consejos de prudencia indicados en la FDS y etiqueta del producto.

PREPARACIÓN

  • R1a – R1b: Reconstituir el contenido de un vial de R1a con 5 mL de R1b tampón.
  • R2 – CAL: Listos para su uso.
  • Para la utilización de este reactivo en analizadores automáticos, se debe diluir R2 con 20 mL de R1b.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD

R1 (reactivo reconstituido con el tampón) es estable 5 días a 15-25 ºC o 3 semanas a 2-8 ºC, conservado en ausencia de contaminación bacteriana. El resto de componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.

MATERIAL ADICIONAL

  • Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
  • Baño termostatable a 37ºC (± 0,1ºC).
  • Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
  • Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRAS

Plasma heparinizado o EDTA plasma.

Extraer sangre sin hemólisis y almacenar en baño de hielo. Separar el plasma o suero de los eritrocitos dentro de los 30 minutos después de la extracción. El ensayo de amoniaco se debe realizar inmediatamente. El plasma se puede conservar 2 horas a 2-8 ºC.

PROCEDIMIENTO

  1. Condiciones del ensayo:
    Longitud de onda: 340 nm.
    Temperatura constante: 25/30/37ºC.
    Paso de luz de la cubeta: 1 cm.
    Se sugiere usar cubetas desechables en lugar de cubetas de flujo, para evitar posibles contaminaciones en analizadores manuales.
  2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
  3. Pipetear en una cubeta:
      Blanco RT Estándar Muestra
    Muestra
    —
    —
    0,1 mL
    Agua destilada
    0,1 mL
    —
    —
    Estándar
    —
    0,1 mL
    —
    Reactivo (R1)
    1,0 mL
    1,0 mL
    1,0 mL
  • Mezclar, y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A1).
  • Añadir entonces:
    GLDH (R2)
    0,01 mL
    0,01 mL
    0,01 mL
  • Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y blanco (A2).

    • CÁLCULOS

    Ablanco = Blanco A1 – Blanco A2
    Amuestra = Muestra A1 – Muestra A2

    Conc. de Amoniaco = ((Amuestra – Ablanco) / (Aestandar – Ablanco)) x Conc. estándar

    CONTROL DE CALIDAD

    Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
    Control de Amoniaco 4×2 mL Ref.1002240. Se debe ensayar el control al menos una vez al día. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.

    Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

    VALORES DE REFERENCIA

    Amoniaco en plasma:

    10 – 47 μmol/L
    0,17 – 0,80 μg/mL
    0,017 – 0,080 mg/dL

    Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

    CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

    Linealidad: El método es lineal hasta 1180 μmol/L (20 μg/mL, 2 mg/dL).
    Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
    Sensibilidad: La mínima concentración detectable con un nivel de precisión aceptable, se determinó como 23,4 μmol/L (0,39 μg/mL).
    Precisión:

      Intraserie (n=43) Interserie (n=43)
    Media (μmol/L)
    66,86
    162,23
    403,26
    66,86
    162,23
    403,26
    SD
    2,86
    3,16
    4,10
    4,72
    10,49
    11,69
    CV (%)
    4,3
    1,9
    1,0
    7,1

    6,5

    2,9