Spermmar IgG 50 Test

Descripción

USO PREVISTO

El SpermMar Test IgG es un kit de diagnóstico para detectar anticuerpos antiespermáticos de la clase IgG en semen o suero humano. La prueba SpermMar Test IgG directa se puede realizar en semen humano no tratado siempre que contenga espermatozoides móviles, la prueba SpermMar Test IgG indirecta se puede utilizar en suero. La presencia de anticuerpos antiespermáticos puede interferir con la función de los espermatozoides, la unión de la zona y la reacción acrosómica.

INFORMACIÓN GENERAL

La presencia de anticuerpos espermáticos que reaccionan con antígenos de los espermatozoides se considera típica y específica de la infertilidad inmunológica. Estos anticuerpos se encuentran en aproximadamente el 8% de los hombres infértiles. Los anticuerpos espermáticos pertenecen a dos clases inmunológicas; Anticuerpos IgA e IgG. Hay algunos datos que indican que la IgA es más importante clínicamente que los anticuerpos IgG. Sin embargo, los anticuerpos IgA rara vez aparecen sin anticuerpos IgG. Por lo tanto, la prueba de anticuerpos IgG es suficiente para la detección de rutina. La prueba SpermMar Test IgG directa se realiza mezclando semen fresco sin tratar con partículas de látex recubiertas con IgG humana. A esta mezcla se le añade un antisuero monoespecífico anti-IgG humana. La formación de aglutinados entre las partículas y los espermatozoides móviles indica la presencia de anticuerpos IgG en los espermatozoides. En la prueba indirecta SpermMar, los espermatozoides de donantes móviles lavados con IgG se incuban con suero de paciente diluido y descomplementado de origen masculino o femenino. Si el suero contiene anticuerpos antiespermáticos, estos cubrirán los espermatozoides del donante, que reaccionarán positivamente en una prueba SpermMar Test IgG posterior.

MATERIALES INCLUIDOS CON LA PRUEBA

• 1 vial que contiene 0,7 ml de partículas de látex SpermMar Test IgG.
• 1 vial que contiene 0,7 ml de antisuero SpermMar Test IgG.

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS

Se prefiere la recolección de semen mediante masturbación. Cuando circunstancias particulares disuaden la recolección mediante masturbación, FertiPro dispone de condones de plástico específicos para la recolección de semen. No se deben utilizar condones comunes para la recolección de semen porque pueden interferir con la motilidad y viabilidad de los espermatozoides. Lo ideal es examinar el semen dentro de 1 hora después de la eyaculación.

PRUEBA DIRECTA DE ESPERMA IGG

Deje que los reactivos y las muestras se ajusten a la temperatura ambiente.

En un portaobjetos coloque:

• 10 microlitros de semen fresco sin tratar.
• 10 microlitros de Partículas de Látex SpermMar Test IgG.
• 10 microlitros de SpermMar Test IgG Antisuero.

Nota: Para utilizar las pipetas microcapilares: Inserte el extremo de la pipeta marcado con la línea negra gruesa en la pera de goma (aproximadamente 5 mm). Deje que la pipeta se llene por acción capilar hasta la primera marca (10 microlitros). No aspire líquido hacia la pera de goma. Sosteniendo el bulbo entre el pulgar y el dedo medio, apriete suavemente el bulbo para expulsar el líquido de la pipeta.

Mezclar la muestra y el reactivo de látex 5 veces con el borde de un cubreobjetos.

Mezcle el Antisuero con el reactivo de látex y la mezcla de muestra.

Se coloca el cubreobjetos sobre la mezcla y se observa la mezcla bajo un microscopio óptico usando un aumento de 400x o 600x (el contraste de fases o la iluminación de campo oscuro pueden facilitar la lectura de los portaobjetos).

Lea el resultado después de 2-3 minutos. Observe si hay partículas de látex adheridas a los espermatozoides móviles. Cuente 100 espermatozoides para determinar el porcentaje de espermatozoides reactivos.

Si no se observa adherencia de las perlas al esperma, lea nuevamente después de 10 minutos. Nota: Mantenga la preparación en una cámara húmeda (por ejemplo, una placa de Petri que contenga un trozo de papel de filtro humedecido).

PRUEBA DE ESPERMA INDIRECTA IGG

Deje que todos los reactivos y muestras se ajusten a la temperatura ambiente.

Inactive las muestras de suero calentándolas a 56°C durante 30 minutos si se utilizan tubos de ensayo de vidrio y 45 minutos si se utilizan tubos de ensayo de plástico.

Ajuste el pH (agregando NaOH o HCl 0,1 N) del EBSS a 7,4 – 7,5.

Lave los espermatozoides móviles del donante dejándolos nadar en el medio con pH ajustado (pH = 7,4 – 7,5). El swim up debe realizarse en tubos de ensayo de vidrio o plástico estériles de 5 ml con fondo redondo a 37°C durante 45 minutos. Ajustar la concentración de espermatozoides a 20×106 sp/ml con medio EBSS. (pH = 7,4 – 7,5).

Diluir en serie la muestra de suero inactivado 1/16 con medio EBSS (pH = 7,4 – 7,5) en una placa de titulación.

Mezcle 50 microlitros de la muestra de suero inactivado diluido (1/16) (paso 5) con 50 microlitros de esperma móvil lavado del donante (paso 4) en un pocillo libre de la placa de titulación. Incubar durante 60 minutos a 37°C.

En un portaobjetos coloque:

• 10 microlitros de la mezcla de esperma y suero.
• 10 microlitros de Partículas de Látex SpermMar IgG.
• 10 microlitros de Antisuero SpermMar IgG.

Mezclar la muestra y el reactivo de látex 5 veces con el borde de un cubreobjetos.

Mezcle el Antisuero con el reactivo de látex y la mezcla de muestra.

Se coloca el cubreobjetos sobre la mezcla y se observa la mezcla bajo un microscopio óptico usando un aumento de 400x o 600x (también se puede usar contraste de fases o iluminación de campo oscuro para facilitar la lectura).

Lea los resultados después de 2-3 minutos. Observe si hay partículas de látex adheridas a los espermatozoides móviles. Cuente 100 espermatozoides para determinar el porcentaje de espermatozoides reactivos. Si no se observa adhesión de partículas al esperma, lea nuevamente después de 10 minutos.

Nota: Mantenga la preparación en una cámara húmeda (por ejemplo, una placa de Petri que contenga un trozo de papel de filtro humedecido). Para evitar la evaporación durante la incubación, cubra siempre con Parafilm.

RESULTADOS

Cuando la prueba se realiza correctamente, la ausencia de anticuerpos espermáticos se demostrará porque los espermatozoides se mueven libremente y no están cubiertos por partículas de látex. Las propias partículas de látex formarán aglutinados en crecimiento, lo que demuestra la reactividad de los reactivos. Sin embargo, en presencia de anticuerpos espermáticos, los espermatozoides quedarán parcialmente cubiertos por partículas de látex. En algunos casos, los espermatozoides pueden incluso quedar inmovilizados por la enorme cantidad de partículas de látex adheridas.

En el SpermMar Test IgG directo, el diagnóstico de infertilidad inmunológica se sospecha cuando entre el 10 y el 39% de los espermatozoides móviles están cubiertos por partículas de látex; Si se cubre el 40% o más de los espermatozoides, la infertilidad inmunológica es muy probable. Pruebas adicionales deberían confirmar el diagnóstico. Siempre que se obtenga un resultado positivo se recomienda realizar el SpermMar Test IgA. En la prueba indirecta SpermMar Test IgG, la ocurrencia de una reacción del 40% o más entre las partículas de látex recubiertas y los espermatozoides móviles se acepta generalmente como el límite inferior de actividad significativa.