Cryptococcal Ag Test Rápido, 50 Test

Para la Detección del Antígeno Criptocócico.

656,86 

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Descripción

PROPÓSITO DEL USO

La prueba de flujo lateral CrAg es un ensayo inmunocromatográfico para la detección cualitativa o semicuantitativa de los antígenos polisacáridos capsulares del complejo de las especies del género Cryptococcus (Cryptococcus neoformans y Cryptococcus gattii) en suero, plasma, sangre (punción venosa y dactilar) y líquido cefalorraquídeo (LCR).

La prueba de flujo lateral CrAg, es una prueba de laboratorio de prescripción que puede ser utilizada como ayuda en el diagnóstico de criptococosis.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

La criptococosis es causada por las dos especies del género (Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii). Los individuos con deficiencia inmune celular son los que corren un mayor riesgo de infección. La criptococosis es una de las infecciones oportunistas más comunes en pacientes con SIDA. La criptococosis es responsable por el 15% de muertes por VIH mundialmente.

La detección del antígeno criptocócico (CrAg) en suero y LCR ha sido ampliamente utilizada con muy alta sensibilidad y especificidad.

El CrAg LFA utiliza anticuerpos monoclonales de ratón anti-criptocócicos altamente sensibles y específicos. Estos anticuerpos son altamente sensibles al glucuronoxilomanano, (GXM), el antígeno primario desprendido por el organismo. La prueba de flujo lateral CrAg muestra una mayor sensibilidad en todos los seriotipos del organismo, especialmente el serotipo C (C.gattii).

La detección del CrAg con la prueba de flujo lateral CrAg se ha empleado ampliamente cuando se sospecha la enfermedad criptocócica.

Reportes preliminares sugieren que los trabajadores sanitarios legos capacitados y el personal de laboratorio pueden usar el ensayo como punto de atención fuera del laboratorio.

PRINCIPIO BIOLÓGICO

La prueba de flujo lateral CrAg en un ensayo inmunocromatográfico tipo sándwich. Los especímenes y el diluyente del espécimen son añadidos a un recipiente adecuado, como un tubo de ensayo, seguido por la tira de flujo lateral. La prueba utiliza la acción capilar para capturar los anticuerpos monoclonales CrAg con oro conjugado y los anticuerpos control conjugados con oro depositados en la membrana del ensayo. Si el CrAg está presente en el espécimen, se une a los anticuerpos anti-CrAg. El complejo antígeno-anticuerpo marcado con oro continúa migrando en la tira hasta la línea de la prueba donde interaccionara con los anticuerpos monoclonales CrAg inmovilizados. El complejo antígeno-anticuerpo forma un sándwich en la línea de prueba produciendo así una línea de prueba visible. Con un flujo adecuado y reactividad de los reactivos, la capilaridad de cualquier espécimen ya sea positivo o negativo, hará que el anticuerpo control conjugado con oro se mueva hacia la línea de control. Los anticuerpos inmovilizados en la línea de control se unirán al anticuerpo control conjugado con oro produciendo una línea de control visible.

Nota: La línea de control es un control de migración y no un control de adicción de muestra. Cuando el resultado es positivo se observan dos líneas (la línea de prueba y la línea de control). Cuando el resultado es negativo se observará una sola línea (línea de control). Si la línea de control no aparece, la prueba no se considera valida.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

Solo para uso Diagnóstico In Vitro.

ADVERTENCIAS PARA LOS USUARIOS

No es recomendando el uso de este kit con muestras diferentes al Suero humano, plasma, LCR, y sangre.

Usar ropa protectora, incluyendo bata de laboratorio, protección ocular/facial y guantes desechables. Es necesario manipular los reactivos del kit y las muestras respetando los requisitos de las Buenas prácticas de laboratorio. Lavarse bien las manos después de realizar la prueba.

Evitar las salpicaduras de las muestras y soluciones.

Los vertidos biológicos deben limpiarse con un desinfectante efectivo. Los desinfectantes que pueden usarse incluyen (aunque sin limitarse a ellos) una solución al 10% de cloro, 70% etanol, o 0.5% de Wescodyne PlusTM. Los materiales usados para limpiar los derrames pueden requerir la eliminación de desechos biológicos/biopeligrosos

Desechar todas las muestras y materiales utilizados para realizar la prueba como si contuviesen un agente infeccioso. Las sustancias químicas de laboratorio y los residuos biopeligrosos deben manipularse y eliminarse según todas las normativas locales, regionales, y nacionales.

Las tiras de prueba CrAg LF (REF LFCR50) pueden ser biopeligrosos después de analizar muestras de pacientes. Manipular y desechar como tal.

Consulte la sección de Peligros e información para conocer los peligros asociados con reactivos específicos. Las Hojas de datos de seguridad están disponibles bajo petición.

PRECAUCIONES PARA LOS REACTIVOS

La estandarización especifica es necesaria para producir nuestros reactivos y materiales de alta calidad. El usuario asume completa responsabilidad por cualquier modificación al procedimiento publicado aquí.

Al manipular muestras de pacientes, se debe de tomar las medidas adecuadas para prevenir la exposición a agentes etiológicos potencialmente presentes.

Siempre use guantes cuando este manipulando los reactivos en este kit, ya que algunos reactivos han sido preservados con azida sódica al 0.095% (p/p). La azida sódica no se debe de tirar por el desagüe, debido a que el químico puede reaccionar con las cañerías de plomo o cobre formando reacciones potencialmente explosivas. El exceso de reactivos debe de desecharse en recipientes adecuados.

Los siguientes componentes no son dependientes del lote del Sistema de prueba: Diluyente del Espécimen LF (REF GLF025) y el Diluyente para la Titulación LF (REF EI0010), y por lo tanto se pueden usar con cualquier lote de tiras de prueba CrAg LF (REF LFCR50), siempre que no haya caducado.

La línea de control es un control de migración y no un control de adicción de muestra.

REACTIVOS

Diluyente del Espécimen LF (3.0 mL, REF GLF025): Solución salina tamponada con glicina, contiene agentes de bloqueo y un preservante.

Diluyente para la Titulación LF (6.0 mL, REF EI0010): Solución salina tamponada con glicina conteniendo un preservante.

Tiras de prueba CrAg LF (50 tiras en un vial con desecante, REF LFCR50). Las tiras miden 0.4 cm de ancho por 7.6 cm de alto.

Control Positivo CrAg (1 mL, REF CB1020): Antígeno criptocócico en solución salina tamponada con glicina (cepa 184A-aislado clínico de la Universidad de Tulane).

Prospecto

MATERIALES NO SUMINISTRADOS

Pipeteador (40 µl y 80 µl) o pipetas de plástico desechable de 40 µl.

Temporizador.

Tubos de microcentrífuga desechables de fondo plano, tubos de ensayo, o una placa de microtitulación capaz de sostener la tira de prueba.

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

Todo el kit debe de estar a temperatura ambiente (20- 25°C) antes y durante su uso. Si el kit es almacenado a una temperatura de 4°C o menor, permitir que el kit alcance una temperatura ambiente antes de abrir.

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DE LOSREACTIVOS

Todos los reactivos incluidos en el kit deberán de almacenarse a la temperatura indicada (2-30°C) hasta la fecha de caducidad que aparece en las etiquetas. Las tiras reactivas sin utilizar deben almacenarse en el frasco de tiras reactivas LF con la tapa cerrada. Todos los reactivos deberán de ser bien cerrados inmediatamente después de ser usados.

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LOSESPECÍMENES

Para resultados óptimos, se deben de usar especímenes estériles y sin hemodializar. La recolección de especímenes de LCR, plasma, y suero debe de ser en forma aséptica utilizando técnicas establecidas por personal cualificado. Si ocurre una demora en el procesamiento en un espécimen, almacenar a 2-8°C por un periodo de hasta 72 horas. Suero, plasma, y LCR pueden ser almacenados por un periodo más largo a <-20°C, evitando la congelación y descongelación repetida de las muestras. Los anticoagulantes de EDTA de sodio, EDTA de potasio, citrato de sodio y heparina han sido validadas para la recolección de plasma. Las muestras de sangre NO deben de ser almacenadas a <0°C. Especímenes de suero, plasma, y LCR en tránsito se deben de mantener a una temperatura de 2-8°C o <-20°C. Los especímenes de sangre en tránsito deben de mantenerse a una temperatura de 2-8°C, no a <-20°C.

PROCEDIMIENTO CUALITATIVO

Steps

Añadir una gota o pipetear 40 µL del Diluyente del Espécimen LF (REF GLF025) a un recipiente adecuado (tubo de microcentrífuga desechables, tubos de ensayo, o una placa de microtitulación, etc.). También es Buena práctica etiquetar la tira de prueba antes de insertarla a la muestra.

Añadir 40 µL de espécimen al recipiente y mezclar.

Sumerja el extremo blanco de la tira reactiva CrAg LFA (REF LFCR50) en el espécimen. Nota: Regresar todas las tiras de prueba sin utilizar al frasco de tiras reactivas con desecante con la tapa cerrada. Todos los reactivos deberán de ser bien cerrados inmediatamente después de ser usados.

Esperar 10 minutos. Nota: Los resultados se pueden leer después de 10 minutos a 2 horas después de insertar las tiras.

Leer y documentar los resultados.

PROCEDIMIENTO DE TITULACIÓN SEMICUANTITATIVO

Prepare las diluciones empezando con una dilución de 1:5, seguida de diluciones seriadas de 1:2 hasta 1:12560

Colocar 10 tubos de microcentrífuga o tubos de ensayo en una gradilla adecuada y etiquetarlos del 1-10 (1:5 a 1:2560). Si la muestra aun es positiva en la dilución 1:12560, se requieren diluciones adicionales. Para conocer los métodos para conservar las tiras, comuníquese con IMMY para solicitar nuestro Procedimiento de algoritmo de titulación.

Añadir 4 gotas o pipetear 160 µL del Diluyente del Espécimen LF (REF GLF025) al tubo #1.

Añadir 2 gotas o pipetear 80 µL del Diluyente para la titulación LF (REF EI0010) a cada uno de los tubos del 2-10.

Añadir 40 µL del espécimen al tubo #1 y mezclar bien.

Transferir 80 µL del espécimen del tubo #1 al tubo #2 y mezclar bien. Continuar con esta dilución hasta el tubo #10. Descartar 80 µL del tubo #10 y 40 µL del tubo #1 para un volumen final de 80 µL en todos los tubos.

Sumerja el extremo blanco de la tira reactiva CrAg LFA en cada uno de los especímenes en los 10 tubos.

Esperar 10 minutos.

Leer y documentar los resultados (refiérase a la sección LECTURA DE LA PRUEBA). Nota: Los resultados se pueden leer después de 10 minutos a 2 horas después de insertar las tiras.

LECTURA DE LA PRUEBA

Leer las reacciones. La presencia de dos líneas (línea de prueba y la línea de control), sin importar la intensidad de la línea de prueba, indica un resultado positivo.

En el procedimiento de titulación semicuantitativo, el título del paciente debe de ser reportado como la dilución más alta que da un resultado positivo. Nota: los títulos obtenidos utilizando la prueba de flujo lateral CrAg de IMMY no son equivalentes con los títulos obtenidos de otros ensayos de antígeno criptocócico.

La presencia de una sola línea (control) indica un resultado negativo. Si la línea de control no aparece, los resultados son inválidos y la prueba debe repetirse. La intensidad de una línea tuene puede ser indicativa de una muestra con un título alto. El procedimiento semicuantitativo debe de ser ejecutado para descartar la posibilidad de inhibición de un título alto de la línea de prueba.

La línea de control es un control de migración y no un control de adicción de muestra.

La estabilidad de la línea de control y la línea de prueba más allá del tiempo de lectura (10 minutos – 2 horas) no ha sido validada.

Resultados

Nota: La tira reactiva puede ser alineada con la imagen en la etiqueta de la bolsa del kit para garantizar una interpretación adecuada de los resultados.

CONTROL DE CALIDAD

Un control positivo puede ser evaluado añadiendo una gota del Diluyente del Espécimen LF (REF GLF025) seguido por una gota del Control Positivo CrAg (REF CB1020) a un tubo. Un control negativo puede ser evaluado añadiendo dos gotas del Diluyente del Espécimen LF (REF GLF025) a un tubo. Insertar la tira reactiva en los tubos y leer el resultado después de 10 minutos.

Nota: Los resultados se pueden leer después de 10 minutos a 2 horas después de insertar las tiras. Dos (2) líneas (Control y prueba) indican un resultado positivo y una línea (control) indican un resultado negativo.

Otros controles adicionales pueden llevarse a cabo según todas las normativas locales, regionales, y nacionales.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Para que una prueba sea válida la línea de control debe de estar presente. La presencia de dos líneas (una línea de control y una línea en la zona de prueba), sin importar la intensidad de la línea, incluyendo líneas tenues, son indicativas de un resultado positivo. La línea de control es un control de migración y no un control de adicción de muestra.

La intensidad de una línea tuene puede ser indicativa de una muestra con un título alto. El procedimiento semicuantitativo debe de ser ejecutado para descartar la posibilidad de inhibición de un título alto de la línea de prueba.

La estabilidad de la línea de control y la línea de prueba más allá del tiempo de lectura (10 minutos – 2 horas) no ha sido validada.

Las interpretaciones basadas en la metodología semicuantitativa pueden ser indicativas de pronóstico y respuesta al tratamiento. Los títulos de antígeno criptocócico mayores de 1: 160 están asociados con el desarrollo de meningitis.

Los resultados negativos no excluyen el diagnóstico de la enfermedad. El espécimen pudo haber sido recolectado antes de que el antígeno esté presente.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

El comportamiento de la prueba no ha sido establecido para otro tipo de muestras diferentes a suero, plasma, sangre y LCR.

La sangre obtenida de la yema del dedo debe medirse con una pipeta para una precisión adecuada.

Los títulos obtenidos utilizando la prueba de flujo lateral no son equivalentes con los títulos obtenidos de otros ensayos de antígeno criptocócico.

Con base a la prevalencia de la enfermedad y del organismo, la prueba no debe realizarse como un procedimiento de cribado para la población en general. El valor predictivo de un resultado serológico positivo o negativo depende de la probabilidad de la presencia de criptococosis. La prueba solo debe de ser realizada cuando la evidencia clínica sugiera el diagnóstico de criptococosis.

Emplear muestras de suero hemodializadas puede dar resultados falso-negativos, debido a la intensidad de color de fondo en la tira reactiva.

Las cepas débilmente encapsuladas pueden llevar a resultados falsos negativos

Según informes publicados, T. beigelii puede causar resultados falsos positivos.

Pacientes con niveles altos (>40 µg/ml) de anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA) pueden causar resultados falsos positivos

Esta prueba no fue evaluada para posibles interferencias relacionadas con el pretratamiento de los especímenes con 2-mercaptoetanol o con especímenes con las siguientes substancias: crema vaginal, cafeína, ácido ascórbico, itraconazol, anfotericina B, acetaminofén o ácido acetilsalicílico.

Información adicional

Marca

Immy, Inc.

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