Descripción
INTRODUCCIÓN
El Medio de Prueba para Dermatofitos (DTM), Modificado con Cloramfenicol, es un medio selectivo y diferencial utilizado para la detección e identificación presuntiva de dermatofitos en muestras clínicas y veterinarias.
PROCEDIMIENTO DE PRUEBA
Inocular muestras representativas con los cultivos listados a continuación.
- Para E. coli y P. aeruginosa, inocular en lineas 1 µL (0.001 mL) de un cultivo de 4 a 5 horas de caldo de soja tripticasa diluido para obtener 106 – 107 UFC/mL.
- Para organismos fúngicos, inocular directamente desde una placa de stock utilizando cultivos fúngicos frescos (de hasta un mes de edad).
- Incubar a 25 ± 2 °C en una atmósfera aeróbica.
- Incluir placas de un lote previamente probado de TSA con un 5% de Sangre de Oveja como controles para E. coli y P. aeruginosa; usar placas de un lote previamente probado de Agar Dextrosa de Sabouraud como controles para los organismos restantes.
Examinar las placas a intervalos de hasta 7 días para observar el crecimiento y la selectividad.
Resultados Esperados:
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Organismos |
ATCC®
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Recuperación
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Coloración del medio
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*Aspergillus brasiliensis
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16404
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Inhibición (parcial a completa)
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N/A
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Escherichia coli
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25922
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Inhibición (parcial a completa)
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N/A
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*Microsporum audouinii
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9079
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Crecimiento moderado a abundante
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Rosa a rojo
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*Pseudomonas aeruginosa
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10145
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Inhibición (parcial a completa)
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N/A
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*Trichophyton mentagrophytes
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9533
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Crecimiento moderado a abundante
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Rosa a rojo
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*Organismo recomendado para el Control de Calidad del Usuario.
CONTROL DE CALIDAD ADICIONAL
- Examinar las placas según se describe en «Deterioro del Producto».
- Examinar visualmente placas representativas para asegurar que cualquier defecto físico existente no interfiera con el uso.
- Determinar el pH potenciométricamente a temperatura ambiente para cumplir con la especificación de 5.5 ± 0.2.
- Observar la firmeza de los lechos de agar durante el procedimiento de inoculación.
- Incubar placas representativas no inoculadas a 33 – 37 °C y 20 – 25 °C durante 72 h y examinarlas en busca de contaminación microbiana.
USO PREVISTO
El Medio de Prueba para Dermatofitos (DTM) es un medio selectivo y diferencial utilizado para la detección e identificación presuntiva de dermatofitos en muestras clínicas. Debido a la falta de disponibilidad de uno de los agentes inhibidores, la clortetraciclina, se recomienda el uso del Medio de Prueba para Dermatofitos (DTM), Modificado con Cloramfenicol como sustituto de la formulación original del DTM.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
Los dermatofitos causan infecciones fúngicas cutáneas del cabello, la piel y las uñas generalmente conocidas como tiña o tiña. Los miembros de los géneros Trichophyton, Microsporum y Epidermophyton son los agentes etiológicos más comunes de estas infecciones. Taplin et al. desarrollaron el DTM como un medio de detección para el aislamiento selectivo y la detección de dermatofitos en muestras clínicas. Una combinación de tres agentes antimicrobianos (cicloheximida, clortetraciclina y gentamicina) inhibía bacterias y levaduras saprófitas y mohos. La falta de disponibilidad de clortetraciclina a fines de 1992 resultó en la sustitución de cloramfenicol por clortetraciclina. Los dermatofitos se identifican presuntivamente basándose en la morfología macroscópica y la producción de metabolitos alcalinos, que elevan el pH y hacen que el indicador de rojo de fenol cambie el color del medio de amarillo a rosa a rojo. Taplin et al. informaron que el medio (con clortetraciclina) tenía una precisión del 97 al 100% para identificar dermatofitos.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
El Digerido papaico de harina de soja proporciona los aminoácidos y otras sustancias nitrogenadas necesarias para sostener el crecimiento fúngico. La dextrosa es una fuente de energía. El rojo de fenol, un indicador colorimétrico, se incluye para visualizar el aumento del pH del medio. Los agentes antimicrobianos mejoran la recuperación de los dermatofitos al inhibir bacterias y hongos saprófitos. La cicloheximida es un agente antifúngico activo contra levaduras y mohos saprófitos, pero inactivo contra dermatofitos. El cloramfenicol es un antibiótico de amplio espectro que inhibe una amplia gama de bacterias grampositivas y gramnegativas. La gentamicina es un antibiótico aminoglucósido que inhibe bacterias gramnegativas y algunas bacterias grampositivas, incluyendo estafilococos.
REACTIVOS
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Papaic Digest of Soybean Meal |
10.0 g
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Dextrose
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10.0 g
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Agar
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24.0 g
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Phenol Red
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0.2 g
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Cycloheximide
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0.5 g
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Gentamicin
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0.1 g
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Chloramphenicol
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0.1 g
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Advertencias y Precauciones: Para uso diagnóstico in vitro. Los tubos y botellas con tapones ajustados deben abrirse con cuidado para evitar lesiones debido a la rotura del vidrio. Microorganismos patógenos, incluidos los virus de la hepatitis y el Virus de Inmunodeficiencia Humana, pueden estar presentes en especímenes clínicos. Se deben seguir las «Precauciones Estándar» y las pautas institucionales para manejar todos los elementos contaminados con sangre y otros fluidos corporales. Antes de desecharlos, esterilice las placas preparadas, las botellas, los recipientes de muestras y otros materiales contaminados mediante autoclave.
Instrucciones de Almacenamiento: Al recibirlos, almacene los tubos en la oscuridad a 2 – 8 °C. Evite el congelamiento y el sobrecalentamiento. No los abra hasta que esté listo para usarlos. Minimice la exposición a la luz. Los medios en tubos almacenados según la etiqueta hasta justo antes de su uso pueden ser inoculados hasta la fecha de vencimiento e incubados durante los tiempos de incubación recomendados. Permita que el medio se caliente a temperatura ambiente antes de la inoculación.
Deterioro del Producto: No use el medio si muestra evidencia de contaminación microbiana, decoloración, sequedad u otros signos de deterioro.
PROCEDIMIENTO
Material Suministrado: Medio de Prueba para Dermatofitos (DTM), Modificado con Cloramfenicol.
Materiales Requeridos pero no Suministrados: Medios de cultivo auxiliares, reactivos, organismos de control de calidad y equipo de laboratorio según sea necesario.
Procedimiento de Prueba: Observar técnicas asépticas. Inocular el medio tan pronto como sea posible después de que la muestra llegue al laboratorio. Coloque la muestra en el centro de la superficie de agar y presiónela ligeramente en el agar para asegurar un contacto firme con el medio. Reemplace la tapa sueltamente para permitir la circulación de aire e incube a 22 – 25 °C durante hasta 14 días.
Control de Calidad del Usuario: Consulte «Procedimientos de Control de Calidad». Los requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las regulaciones locales, estatales y/o federales aplicables o los requisitos de acreditación y los procedimientos de control de calidad estándar de su laboratorio. Se recomienda que el usuario consulte la orientación pertinente del CLSI y las regulaciones del CLIA para prácticas apropiadas de control de calidad.
RESULTADOS
Los dermatofitos producen una morfología típica y un color rosa a rojo en el medio alrededor de la colonia dentro de los 10 – 14 días de incubación. Desconsidere los cambios de color después del decimocuarto día de incubación porque pueden ser causados por hongos contaminantes.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Un solo medio rara vez es adecuado para detectar todos los organismos de importancia potencial en una muestra. Los agentes en los medios selectivos pueden inhibir algunas cepas de la especie deseada o permitir el crecimiento de una especie que fueron diseñados para inhibir, especialmente si la especie está presente en grandes cantidades en la muestra. Por lo tanto, las muestras cultivadas en medios selectivos también deben ser cultivadas en medios no selectivos para obtener información adicional y ayudar a asegurar la recuperación de patógenos potenciales. Para la identificación, los organismos deben estar en cultivo puro. Se deben realizar pruebas morfológicas, bioquímicas y/o serológicas para la identificación final. Consulte textos apropiados para obtener información.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Antes de su liberación, todos los lotes del Medio de Prueba para Dermatofitos (DTM) Modificado con Cloramfenicol se prueban en cuanto a características de rendimiento. Se inoculan muestras representativas del lote directamente con cultivos frescos de Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533, Microsporum audouinii ATCC 9079 y Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, cultivados en placas de Agar Dextrosa de Sabouraud BBL. Los recipientes se incuban a 20 – 27 °C durante hasta siete días en una atmósfera aeróbica. Se observa crecimiento moderado a abundante y desarrollo de color rosa/rojo en el medio con T. mentagrophytes y M. audouinii. A. brasiliensis está parcialmente a completamente inhibido.
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