Descripción

FÓRMULA TEÓRICA

Mueller Hinton 38 g/l.
Sodio Cloruro 5 g/l.
Almidón de maíz 1 g/l.
Sangre de Cordero 53 ml.
pH 7,2 ±0,2.

DESCRIPCIÓN Y USOS

Después de amplias investigaciones, the National Committee for Clinical Laboratory Standards, en 1966, recomendaba el medio de Mueller-Hinton para el método de Kirby-Bauer de investigación de sensibilidad antibiótica para Pneumococo y otros microorganismos. Este medio garantiza condiciones muy favorables para el crecimiento bacteriano y cuenta con una ausencia muy considerable de factores que pudieran interferir en la interpretación de resultados:

Contiene cantidades mínimas de Timina i Timidina que inhibirian la actividad del Trimethoprim.
Carece casi por completo de ácido paraaminobenzoico (PABA), que antogoniza las sulfonamidas.
Las concentraciones de Calcio y Magnesio están equilibradas para evitar problemas con la sensibilidad de Pseudomonas a los aminoglicósidos.
La adición de Sangre desfibrinada estéril de Cordero no altera los resultados de sensibilidad y permite el crecimiento de Neumococo aportándole nutrientes esenciales.

El método conocido como el de Kirby-Bauer se basa en la difusión del antibiótico contenido en discos, de papel o no, depositados sobre la superficie del medio previamente inoculado con microorganismos. El crecimiento queda inhibido alrededor del disco, donde el antibiótico alcanza concentraciones inhibitorias. La medida del halo de inhibición bacteriana es proporcional a la concentración mínima inhibitoria que encontraríamos por métodos de microdilución. Existen tablas editadas por la NCCLS para determinar, dependiendo del halo medido, si el microorganismo es sensible o resistente al antibiótico testado.

UTILIZACIÓN E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Antes de la siembra es recomendable que las placas alcancen la temperatura ambiente. La superficie del medio debe aparecer húmeda sin exceso de agua.

Partiendo de una solución ajustada a un 0.5 McFarland de absorbancia de la cepa a testar, inocular con un escobillón la superficie del medio.

Añadir los discos de los antibióticos que se desea testar al microorganismo, sin que hayan transcurrido más de 10 minutos después de la inoculación.

La excesiva deshidratación del medio impediría la dilución parcial y posterior difusión del antibiótico contenido en los discos.

Después de 24 horas a 37 ºC, medir los diámetros de los halos de inhibición y remitirse a las tablas del fabricante del antibiótico para su interpretación como sensible/intermedio/resistente dependiendo de la carga.

ALMACENAMIENTO

Las placas con este medio deben conservarse en refrigeración a 4-15 ºC, preferiblemente en la oscuridad, evitando choques térmicos excesiva refrigeración que podría hemolizar el medio de cultivo.

La caducidad y el número de lote vienen indicados en la base de cada placa individualmente. Todos los medios suplementados con sangre tienen una caducidad máxima de 3 meses.

CONTROL DE CALIDAD

Respuesta típica después de una incubación de 24 h. a 37 ±2ºC en un 5% de CO₂:

Streptococcus pneumoniae	ATCC 49619	Crecimiento excelente.*
Streptococcus pneumoniae	ATCC 6305	Crecimiento excelente.
Streptococcus pyogenes	ATCC 19615	Crecimiento excelente, beta hemólisis.
Streptococcus sanguis	Wild Type	Crecimiento excelente, alfa.

* Aplicar a la cepa de pneumococo control, los antibióticos descritos por la NCCLS para tests de sensibilidad antibiótica. Los diámetros de todos ellos deben quedar comprendidos dentro de los márgenes referenciados.