Descripción
Sistema de detección, conteo y pruebas de susceptibilidad de microorganismos patógenos urogenitales.
DESCRIPCIÓN
A.F. Genital System es un sistema de 24 pocillos que contiene sustratos bioquímicos y antibióticos desecados para detección, presunción identificación y pruebas de susceptibilidad de microorganismos a partir de muestras urogenitales. El sistema también proporciona una evaluación semicuantitativa de la presencia de micoplasmas urogenitales, es decir, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum. El sistema se inocula con la suspensión de la muestra clínica y se incuba a 36 ± 1°C por 18-24 horas. Los resultados de la prueba se leen después de 24 horas de incubación. La interpretación se realiza evaluando el cambio de color de los distintos pocillos y realizando un examen microscópico.
Nota: La especie Ureaplasma urealyticum se ha dividido en dos nuevas especies: Ureaplasma parvum y Ureaplasma urealítico. Se consideran juntos como Ureaplasma spp. al usar este dispositivo y se indica como Uu.
CONTENIDO DEL KIT
- 20 A.F. Genital System.
- Hoja de instrucciones.
- 20 viales de solución fisiológica (7,0 ml/vial)
- Formulario de resultados de la prueba.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
- A.F. Genital System Reagent (ref. 80258).
- Mycoplasma Transport Broth (ref. 20158).
- Strepto B Latex Kit (ref. 96153).
- Hisopos de muestreo.
- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Microscopio.
CONFIGURACIÓN
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Pocillo |
Recuento e identificación de micoplasmas/ureaplasmas
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1-Uu 103
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Ureaplasma spp. (título = 103 CFU/mL)
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2-Uu 104
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Ureaplasma spp. (título = 104 CFU/mL)
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3-Uu ≥ 105
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Ureaplasma spp. (título ≥ 105 CFU/mL)
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4-Mh 104
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Mycoplasma hominis (título = 104 CFU/mL)
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5-Mh ≥ 105
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Mycoplasma hominis (título ≥ 105 CFU/mL)
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Pocillo
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Detección de T. vaginalis y Candida spp.
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6-TR/YE
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Trichomonas vaginalis / Candida spp.
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Pocillo
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Test de susceptibilidad de los micoplasmas/ureaplasmas
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7-TE
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Tetracycline – 8 μg/mL
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8-PEF
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Pefloxacin – 16 μg/mL
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9-OFX
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Ofloxacin – 4 μg/mL
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10-DO
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Doxycycline – 8 μg/mL
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11-E
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Erythromycin – 16 μg/mL
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12-CLA
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Clarithromycin – 16 μg/mL
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13-MN
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Minocycline – 8 μg/mL
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14-JOS
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Josamycin – 8 μg/mL
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15-CD
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Clindamycin – 8 μg/mL
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Pocillo
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Detección e identificación presuntiva de otros microorganismos
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16-ESC
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Escherichia coli
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17-PRO
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Proteus spp. / Providencia spp.
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18-PSE
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Pseudomonas spp.
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19-GAR
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Gardnerella vaginalis
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20-STF
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Staphylococcus aureus
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21-STR
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Enterococcus faecalis
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22-NES
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Neisseria gonorrhoeae
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23-STG
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Streptococcus agalactiae (Group B)
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24-CAN
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Candida spp.
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PRINCIPIO DEL MÉTODO
A.F. Genital System permite la detección, conteo semicuantitativo, identificación presuntiva y prueba de susceptibilidad de Mycoplasma hominis y Ureaplasma spp., y la detección e identificación presuntiva de los microorganismos más frecuentemente aislados de hisopos vaginales, uretrales y líquido seminal: Trichomonas vaginalis, Escherichia coli, Proteus spp./ Providencia spp., Pseudomonas spp., Gardnerella vaginalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus agalactiae (Grupo B) y Candida spp.
- El recuento semicuantitativo de Ureaplasma spp. se indica mediante un cambio de color de amarillo a rojo en los pocillos 1-Uu 103, 2-Uu 104 y 3-Uu ≥ 105.
- El recuento semicuantitativo de Mycoplasma hominis se evidencia por un cambio de color de amarillo a rojo en pocillos 4-Mh 104 y 5-Mh ≥ 105.
- La presencia de Trichomonas vaginalis y Candida spp. se determina mediante el examen microscópico (40x) de una gota de líquido de cultivo tomado del pocillo 6-TR/YE para evaluar la presencia de trofozoítos ciliados móviles para la identificación de Trichomonas vaginalis y/o la presencia de clamidosporas e hifas para la identificación de Candida spp.
- El cambio de color rojo del medio en los pocillos que contienen un antibiótico (7-TE, 8-PEF, 9-OFX, 10-DO, 11-E, 12-CLA, 13-MN, 14-JOS, 15-CD) indica la presencia de crecimiento bacteriano y, por lo tanto, resistencia a la concentración de antibiótico siendo probado. El color amarillo del medio indica la ausencia de crecimiento bacteriano y por lo tanto la susceptibilidad a la concentración de antibiótico que se está probando.
- La presencia de Escherichia coli se detecta por un cambio de color de rojo grisáceo a azul en el pocillo 16-ESC. Confirmar la presencia de Escherichia coli agregando dos gotas de Reactivo Kovacs en el pocillo 17-PRO; esperar a que se forme un anillo rosa-rojo.
- La presencia de Proteus spp./Providencia spp. se muestra por un cambio de color de amarillo a marrón-negro en el pocillo 17-PRO.
- La presencia de Pseudomonas spp. se muestra por un cambio de color de amarillo a verde turbio en el pocillo 18-PSE. Confirmado por prueba de oxidasa (A.F. Genital System Reagent, ref. 80258).
- La presencia de Gardnerella vaginalis se muestra por un cambio de color de rojo a amarillo-naranja en el pocillo 19-GAR. Confirmado por aislamiento en medios selectivos (Gardnerella Agar, ref. 11054) y pruebas bioquímicas (Integral System Gardnerella, ref. 71724).
- La presencia de Staphylococcus aureus se muestra por la aparición de un anillo negro en el fondo del pocillo 20-STF. Confirmar por prueba de coagulasa (ref. 88030).
- La presencia de Enterococcus faecalis se muestra por un cambio de color de amarillo a negro en el pocillo 21-STR.
- La presencia de Neisseria gonorrhoeae está indicada por una prueba de oxidasa positiva del pocillo 22-NES (A.F. Genital System reactivo, ref. 80258). Confirme el resultado por aislamiento en medios selectivos (Thayer Martin Agar, ref. 11040), y realizando pruebas bioquímicas y/o serológicas.
- La presencia de Streptococcus agalactiae (Grupo B) se muestra por un cambio de color de amarillo a verde en el pocillo 23-STG. Confirme la presencia de Streptococcus agalactiae con los siguientes métodos:
- Test de aglutinación Strepto B Latex Kit (ref. 96153).
- Aislamiento con métodos tradicionales.
- La presencia de Candida spp. se muestra mediante un cambio de color de verde a amarillo en el pocillo 24-CAN. Observar al microscopio la presencia de clamidosporas e hifas.
RECOLECCIÓN Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA
Obtener la secreción vaginal o uretral con hisopos de fibra sintética.
Obtener el líquido seminal según la técnica prevista para el examen del cultivo microbiológico.
Las muestras deben enviarse para su inoculación en el A.F. Genital System inmediatamente después de su toma. No guardar en el frigorífico ni siquiera por periodos de tiempo limitados, ya que las bajas temperaturas pueden dañar la vitalidad de algunos microorganismos particularmente sensibles (por ejemplo, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, etc.) y alterar el resultado final.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA CLÍNICA
Abra con cuidado un vial de Solución fisiológica* utilizando el craqueador de ampollas proporcionado con el kit.
- HISOPO VAGINAL – HISOPO URETRAL
Sumergir el hisopo (después de obtener el material clínico) en el vial de solución fisiológica y esperar 5 minutos. Con cuidado apriete el hisopo contra la pared del vial para que el material clínico se disperse homogéneamente en la Solución Fisiológica.
Nota: Conservar el hisopo, sumergido en caldo nutritivo, hasta la conclusión de la prueba.
- LÍQUIDO SEMINAL
Agregue 0,2 mL de muestra al vial de Solución Fisiológica*, agite y espere 5 minutos antes de la inoculación.
- ORINA
Centrifugar unos 10 ml de muestra de orina. Recoja 0,1 mL de sedimento urinario y agréguelo al vial de Solución Fisiológica* contenido en el kit; agitar y esperar 5 minutos antes de inocular el sistema.
- MATERIAL CLÍNICO DE Mycoplasma Transport Broth (ref. 20158)
Agregue 1 ml de Mycoplasma Transport Broth, que contiene la muestra que se está examinando, al vial de solución fisiológica*, agite suavemente y espere 5 minutos antes de la inoculación.
Nota: Conserve la muestra en el vial de Mycoplasma Transport Broth hasta la conclusión de la prueba.
* Solución fisiológica (gL): Cloruro de sodio 9 g; Agua destilada 1000 mL; pH 6,8 ± 0,2.
INOCULACIÓN DEL SISTEMA
- Saque un sistema de su envoltorio y llévelo a temperatura ambiente.
- Anotar el nombre del paciente, la fecha de inicio del examen y el tipo de material clínico.
- Transfiera 0,2 ml de suspensión de la muestra clínica a cada pocillo del sistema.
- Recubrir con 1 gota de aceite de vaselina para uso microbiológico todos los pocillos incluido el 19-GAR, excepto los pocillos 6, 16, 17, 18, 20, 21, 22 y 23.
- Cubra el sistema con la tapa provista e incube a 36 ± 1 °C durante 24 horas y hasta 48 horas.
- Observe y confirme la presencia de micoplasmas dentro de las 48 horas de incubación.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Recuento e Identificación de micoplasmas/ureaplasmas
Observe el cambio de color en los pocillos 1-Uu 103 a 5-Mh ≥ 105 e interprete los resultados usando la Tabla 1.
Detección de Trichomonas vaginalis y Candida spp.
Tomar una gota de líquido del pocillo, depositarla en un portaobjetos de vidrio, colocar encima un cubreobjetos y examinar al microscopio (40x) por la presencia de T. vaginalis y Candida spp. Interprete como se indica en la Tabla 1.
Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de micoplasmas/ureaplasmas
Observe el cambio de color en los pocillos 7-TE a 15-CD e interprete los resultados usando la Tabla 1.
Identificación de Escherichia coli
Observe el cambio de color en el pocillo 16-ESC e interprete los resultados utilizando la Tabla 1. Para confirmar la presencia de E. coli, agregue dos gotas de reactivo de Kovacs en el pocillo y esperar a que se forme un anillo rosa-rojo.
Identificación de Neisseria gonorrhoeae
Tome una gota de líquido del pocillo 22-NES, deposítela en una Varilla de Prueba de Oxidasa y observe el desarrollo inmediato (en unos 10 segundos) de color azul (prueba de oxidasa positiva). Confirmar la presencia de N. gonorrhoeae mediante aislamiento en medios: rayar la torunda vaginal o uretral, previamente conservada en caldo nutritivo (ver punto 1 en el PROCEDIMIENTO DE ENSAYO), directamente en la superficie de una placa selectiva (Thayer Martin Agar ref. 11040). Incube la placa a 36 ± 1 °C en atmósfera microaeróbica, y realizar pruebas bioquímicas y serológicas para su identificación final.
Identificación de Streptococcus agalactiae
Esté atento al cambio de color en el pocillo 23-STG e interprete los resultados usando la Tabla 1. Confirme la presencia de S. agalactiae con prueba de aglutinación Strepto B Latex Kit (ref. 96153) y por aislamiento con métodos tradicionales.
Identificación presuntiva de otros microorganismos
Observe el cambio de color en los pocillos 17-PRO a 24-CAN ed e interprete los resultados usando la Tabla 1.
Anote los resultados en el FORMULARIO DE RESULTADOS DE LA PRUEBA (copie tantos formularios como sea necesario).
Tabla 1.
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Pocillo |
Recuento e identificación de micoplasmas/ureaplasmas
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Color del pocillo
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Reacción positiva*
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Reacción negativa
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1-Uu 103
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Ureaplasma spp. (título = 103 CFU/mL)(1)
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rojo
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amarillo
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2-Uu 104
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Ureaplasma spp. (título = 104 CFU/mL)(2)
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rojo
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amarillo
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3-Uu ≥ 105
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Ureaplasma spp. (título ≥ 105 CFU/mL)(3)
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rojo
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amarillo
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4-Mh 104
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Mycoplasma hominis (título = 104 CFU/mL)
|
rojo
|
amarillo
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5-Mh ≥ 105
|
Mycoplasma hominis (título ≥ 105 CFU/mL)
|
rojo
|
amarillo
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CFU: Unidades Formadoras de Colonias.
* Una coloración anaranjada se debe considerar como una prueba positiva.
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Pocillo
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Detección de T. vaginalis y Candida spp.
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Examen con microscopio (40x)
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6-TR/YE
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Trichomonas vaginalis / Candida spp.
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T. vaginalis: protozoitos ciliados móviles
Candida spp.: clamidosporas e hifas
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Pocillo
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Test de susceptibilidad de los micoplasmas/ureaplasmas
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Color del pocillo
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S
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R**
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7-TE
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Tetracycline – 8 μg/mL
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amarillo
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rojo
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8-PEF
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Pefloxacin – 16 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
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9-OFX
|
Ofloxacin – 4 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
|
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10-DO
|
Doxycycline – 8 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
|
|
11-E
|
Erythromycin – 16 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
|
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12-CLA
|
Clarithromycin – 16 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
|
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13-MN
|
Minocycline – 8 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
|
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14-JOS
|
Josamycin – 8 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
|
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15-CD
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Clindamycin – 8 μg/mL
|
amarillo
|
rojo
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S = Sensible
R = Resistente
** Una coloración anaranjada debe considerarse como presencia de crecimiento y, por lo tanto, de resistencia a la concentración de antibiótico probada.
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|
Pocillo
|
Detección e identificación presuntiva de otros microorganismos
|
Color del pocillo
|
|
Reacción positiva
|
Reacción negativa
|
|
16-ESC
|
Escherichia coli
|
azul
|
gris-rojo
|
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17-PRO
|
Proteus spp. / Providencia spp.
|
marrón-negro
|
amarillo
|
|
18-PSE
|
Pseudomonas spp.
|
Verde turbio
|
amarillo-azul
|
|
19-GAR
|
Gardnerella vaginalis
|
amarillo-naranja
|
rojo
|
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20-STF
|
Staphylococcus aureus
|
anillo negro
|
amarillo
|
|
21-STR
|
Enterococcus faecalis
|
negro
|
amarillo
|
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22-NES
|
Neisseria gonorrhoeae
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azul(4)
|
incoloro(4)
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23-STG
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Streptococcus agalactiae (Group B)
|
verde
|
amarillo
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24-CAN
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Candida spp.
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amarillo turbio
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verde
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(1) = equivalente a 5-20 colonias cultivadas en Mycoplasma Agar A7.
(2) = equivalente a 20-50 colonias cultivadas en Mycoplasma Agar A7.
(3) = Más de 50 colonias cultivadas en Mycoplasma Agar A7.
(4) = Resultado de la prueba de oxidasa.
Cada lote de A.F. Genital System se somete a un control de calidad utilizando los siguientes microorganismos de referencia:
Mycoplasma hominis ATCC 23114. Gardnerella vaginalis ATCC 14018. Ureaplasma urealiticum ATCC 27618. Staphylococcus aureus ATCC 25923. Candida albicans ATCC 10231. Streptococcus faecalis ATCC 19433. Escherichia coli ATCC 25922. Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424. Proteus mirabilis ATCC 25933. Streptococcus agalactiae ATCC 13813. Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Trichomonas vaginalis ATCC 30001.
El producto A.F. Genital System no está clasificado como peligroso según la legislación vigente, no obstante consultar la ficha de datos de seguridad para una uso correcto. A.F. Genital System es un dispositivo desechable para uso exclusivo de diagnóstico in vitro. Debe ser utilizado en el laboratorio por personal debidamente capacitado, utilizando métodos asépticos y de seguridad aprobados para el manejo de agentes patógenos.
Conservar a 2-8°C en el embalaje original. Mantener alejado de fuentes de calor y evitar cambios excesivos de temperatura. En tales condiciones, el producto seguirá siendo válido hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No lo use más allá de esa fecha. Eliminar sin usar si hay signos de deterioro.
Después de su uso, A.F. Genital System y el material que haya estado en contacto con la muestra deben descontaminarse y desecharse de acuerdo con las técnicas utilizadas en el laboratorio para la descontaminación y eliminación de material potencialmente infectado.
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