Descripción
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El Waaler Rose es una técnica de hemaglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de FR en suero humano. Los hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados con IgG de conejo antihematíe de oveja, son aglutinados por FR presentes en la muestra del paciente.
SIGNIFICADO CLÍNICO
Los factores reumatoides son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fracción Fc de las inmunoglobulinas G. Aunque se hallan presentes en un gran número de desordenes reumáticos, tales como el lupus eritematoso sistémico (SLE) y el síndrome de Sjögren, su principal interés clínico radica en el diagnóstico de la artritis reumatoide (RA).
Un estudio actual realizado por el «American College of Rheumatolgy» demostró que el 80,4% de pacientes con artritis reumatoide fueron positivos para el FR.
REACTIVOS
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Waaler Rose |
Suspensión hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados
con IgG de conejo anti-hematíe de oveja, pH,
8,2. Conservante.
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Control +
Tapón rojo
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Suero humano con una concentración de FR > 30
UI/mL. Conservante.
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Control –
Tapón azul
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Suero animal. Conservante.
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PRECAUCIONES
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
CALIBRACIÓN
La sensibilidad del reactivo de WR está estandarizado frente el Calibrador Internacional de FR de OMS (WHO 64/1 Rheumatoid Arthritis Serum).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit están listos para su uso, y son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la contaminación durante su uso. No congelar: la congelación de los reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de éstos.
Conservar los viales siempre en posición vertical. En caso de cambio de posición agitar hasta la disolución de posibles agregados.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y turbidez.
MATERIAL ADICIONAL NO SUMINISTRADO
- Agitador vortex.
- Pipetas de 50 µl.
MUESTRAS
Suero fresco. Estable 8 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC. Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de usar. No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.
PROCEDIMIENTO
Método cualitativo
- Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
- Depositar 50 µl de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta.
- Mezclar el reactivo de WR vigorosamente o con el agitador vortex antes de usar. Depositar una gota (50 µl) junto a cada una de las gotas anteriores.
- Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
- Situar el porta sobre una superficie lisa y plana durante 2 minutos.
- Inmediatamente después, inclinar el porta unos 45º de la horizontal y dejarlo nuevamente en reposo durante 1 minuto. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.
Método semicuantitativo
- Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
- Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de finalizar la reacción, evitando mover o levantar el porta durante la observación. La presencia de aglutinación indica una concentración de FR igual o superior a 8 UI/mL (Nota 1). En el método semicuantitativo, se define el título como la dilución mayor que da resultado positivo.
CÁLCULOS
La concentración aproximada de FR en la muestra del paciente se obtiene mediante la siguiente fórmula:
8 x Título de FR = UI/mL
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad del reactivo de látex, así como modelo de comparación para la interpretación de los resultados.
Todo resultado distinto al resultado que da el control negativo, se considerará positivo.
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 8 UI/mL. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Sensibilidad analítica: 8 (6-16) UI/mL, en las condiciones descritas en el ensayo.
Efecto prozona: No se observa efecto prozona hasta valores de 800 UI/mL.
Sensibilidad diagnóstica: 100 %.
Especificidad diagnóstica: 93,6 %.
INTERFERENCIAS
Bilirrubina (20 mg/dL), hemoglobina (10 g/L) y los lípidos (10 g/L) no interfieren. Otras sustancias pueden interferir.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
La incidencia de resultados falsamente positivos es del 3-5%. Individuos que padecen otras enfermedades como mononucleosis infecciosa, hepatitis, sífilis, y personas de edad avanzada, pueden dar lugar a resultados positivos falsos.
Es importante para establecer un buen diagnóstico de la enfermedad, realizar también una prueba de FR-látex, juntamente con el examen clínico del paciente.
NOTAS
Los resultados obtenidos con el método de Waaler Rose no son comparables con los obtenidos mediante el método de FR-látex. La diferencia de resultados entre técnicas no refleja diferencias en cuanto a la capacidad de ambas para detectar factores reumatoides.
PRESENTACIÓN
- 2,5 mL Waaler Rose.
- 1 mL Control +.
- 1 mL Control -.
- 8 x 6 portas desechables.
SGIS05-E 06/06/13
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