Anti-D igG + igM (Rh0) monoclonal, 10 ml

PRECAUCIONES

1. Los reactivos son sólo para uso en diagnóstico in vitro.
2. Si el vial del reactivo está roto o agrietado, descartar inmediatamente su contenido.
3. No utilizar reactivos caducados (ver la etiqueta de vial).
4. No utilizar reactivos que presenten precipitados.
5. La manipulación del reactivo debe realizarse con la apropiada indumentaria de protección, tales como guantes desechables y bata de laboratorio.
6. Los reactivos han sido filtrados a través de cápsulas de 0,2 μm para reducir la carga biológica, pero no son suministrados estériles. Una vez abierto el vial, el contenido debe permanecer viable hasta la fecha de caducidad, siempre y cuando no haya una marcada turbidez, la cual podría ser indicativa de deterioración o contaminación del reactivo.
7. Los reactivos contienen <0,1% de azida sódica. La azida sódica puede ser tóxica, si se ingiere y puede reaccionar con cobre o plomo de las tuberías y formar azidas metálicas explosivas. En caso de eliminación del producto, hacerlo con abundante agua del grifo.
8. Los materiales utilizados en la producción de los productos fueron analizados en origen mediante tests microbiológicos aprobados y resultaron ser negativos para anticuerpos contra VIH 1+2 y VHC, y para el antígeno HBs.
9. Ningún método puede garantizar que los productos derivados de fuentes humanas o animales están libres de enfermedades infecciosas. Manipular y desechar con precaución los viales y su contenido.
10. Para mayor información sobre la eliminación del producto o descontaminación en caso de derrame, ver las fichas de seguridad.

NOTAS

1. Se recomienda la utilización de un control positivo (idealmente células R1r), un control negativo (idealmente células rr) para testar de forma paralela en cada tanda de tests. Los tests deben considerarse inválidos si los controles no muestran los resultados esperados.
2. Durante el tipado de hematíes de un paciente diagnosticado con una enfermedad que hace que los hematíes se cubran con anticuerpos u otras proteínas (como EHRN, anemia hemolítica inmunitaria), es importante analizar los hematíes del paciente utilizando un reactivo de control negativo. Las pruebas deben considerarse inválidas si los hematíes se aglutinan con el control negativo.
3. Para determinación de la categoría DVI testar las muestras sólo mediante las técnicas de Antiglobulina Indirecta o Coombs Bio-Rad-ID o Coombs Ortho BioVue.
4. Los antígenos D débiles y las variantes de antígenos D son mal detectados a través de placas de gel, placas microtítulo y porta. Por ello, se recomienda utilizar la técnica en tubo.
5. La técnica antiglobulina en tubo sólo puede considerarse válida si todos los tests negativos reaccionan de forma positiva con células sensibilizadas con IgG.
6. Antes de usar, dejar que el reactivo alcance la temperatura ambiente. Tan pronto como se haya utilizado el reactivo, almacenarlo de nuevo a 2-8 ºC.
7. En métodos aquí recomendadas, un volumen es aproximadamente 50 μL utilizando el gotero suministrado.
8. La utilización de los reactivos y la interpretación de los resultados deben llevarse a cabo por personal cualificado y formado de acuerdo a los requisitos del país dónde los reactivos están siendo utilizados.
9. El usuario debe determinar la idoneidad de los reactivos para otras técnicas.

CONSERVACIÓN

Los viales de reactivo deben almacenarse a 2-8 ºC al recibirlos. El almacenamiento prolongado a temperaturas fuera de este rango puede resultar en una pérdida acelerada de la reactividad del reactivo. Este reactivo ha sido sometido a estudios de estabilidad en transporte a 37 ºC y -25 ºC como se describe en el documento BS EN ISO 23640:2015.

MATERIAL NECESARIO (DEPENDE DEL MÉTODO)  PERO NO PROPORCIONADO

• Anti-globulina humana o Anti-IgG humano.
• Palillos aplicadores.
• Lector de placas automático.
• Lavador de células Coombs.
• Tarjetas Bio-Rad ID-Card (LISS/COOMBS y NaCI, prueba enzimática y crioaglutininas).
• Centrífuga Bio-Rad ID-Centrifuge.
• Bio-Rad ID-CellStab o ID-Diluent 2.
• Incubadora Bio-Rad ID equilibrada a 37 ºC ± 2 ºC.
• Portaobjetos de vidrio para microscopio o cartulinas blancas.
• Tubos de ensayo de vidrio (10×75 mm o 12×75 mm).
• Células sensibilizadas con IgG.
• Centrífuga de microplacas.
• Casetes de Ortho BioVue System (AHG/Coombs y neutros).
• Centrífuga Ortho BioVue System.
• Bloque térmico Ortho BioVue System equilibrado a 37 ºC ± 2 ºC.
• Diluyente de hematíes Ortho 0.8% Red Cell Diluent.
• Agitador de placas.
• Solución de PBS (pH 6,8-7,2) o solución salina isotónica (pH 6,5-7,5).
• Hematíes para control positivo (idealmente R1r) y negativo (idealmente rr).
• Centrífuga de tubos de ensayo.
• Microplacas de pocillos en «U» validadas.
• Pipetas volumétricas.
• Baño termostático o incubadora equilibrados a 37 ºC ± 2 ºC.

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS

Las muestras de sangre se pueden recolectar en EDTA, citrato, anticoagulantes CPDA o como una muestra coagulada. Las muestras deben analizarse lo antes posible después de la recolección. Si se produce un retraso en la prueba, almacene las muestras a 2-8 ºC. Las muestras que presenten hemólisis grave o contaminación microbiana no deben utilizarse para la prueba. Las muestras de sangre que muestran evidencia de lisis pueden dar resultados poco fiables. Es preferible (pero no esencial) lavar todas las muestras de sangre con PBS o solución salina isotónica antes de realizar la prueba.

PROCEDIMIENTOS (NO PARA CATEGORÍA D^VI)

Método en Tubo

1. Preparar una suspensión de hematíes al 2-3% en PBS o solución salina isotónica.
2. Añadir en un tubo identificado: 1 volumen de reactivo Anti-D y un volumen de la suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000 rcf (g) o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
4. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente en busca de aglutinación.
5. Cualquier tubo que muestre un resultado negativo o cuestionable (lo que puede pasar en muestras Du o muestras D débiles) debe ser incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente.
6. Tras la incubación, repetir los pasos 3 y 4.
7.  

Método Bio-Rad ID (NaCI, prueba enzimática y tarjetas de crioaglutininas)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0,8% en ID-CellStab o ID-Diluent 2.
2. Retirar el papel de aluminio de tantos microtubos como sea necesario.
3. Colocar en un microtubo apropiado: 50 μL de suspensión de hematíes y 25 μL de reactivo Spinreact Anti-D.
4. Centrifugar las tarjetas ID-Card en la centrífuga de tarjetas de gel Bio-Rad.
5. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método Ortho BioVue (tarjetas neutrales)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0.8% en Ortho 0.8% Red Cell Diluent.
2. Retirar el papel de aluminio de tantas cámaras de reacción como sea necesario.
3. Colocar en la cámara de reacción adecuada: 50 μL de suspensión de hematíes y 40 μL de reactivo Spinreact Anti-D.
4. Centrifugar los casetes en una centrífuga Ortho BioVue System.
5. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método de Microplaca, usando pocillos “U”

1. Preparar una suspensión al 2-3% de hematíes en PBS o solución salina isotónica.
2. Depositar en el pocillo apropiado: 1 volumen de reactivo Anti-D y 1 volumen de suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente, preferiblemente usando un agitador de microplacas, cuidando de evitar cualquier contaminación cruzada.
4. Incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos (tiempo en función del usuario).
5. Centrifugar la microplaca durante 1 minuto a 140 rcf o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
6. Resuspender el botón celular mediante una agitación cuidadosamente controlada en un agitador de microplacas.
7. Leer macroscópicamente o con un lector automático validado.
8. Cualquier reacción débil debe ser repetida con el método en tubo.

Método en Porta

1. Preparar una suspensión de hematíes al 35-45% en suero, plasma, PBS o solución salina isotónica, o usar sangre entera con anticoagulante (en su propio plasma).
2. Depositar en un portaobjetos de vidrio o en una tarjeta identificados: 1 volumen del reactivo Anti-D y 1 volumen de la suspensión de hematíes.
3. Utilizando un palillo aplicador limpio, mezclar el reactivo y las células en un área de unos 20 x 40 mm.
4. Inclinar lentamente el portaobjetos hacia adelante y hacia atrás durante 30 segundos, y seguir mezclando ocasionalmente durante el período de 1 minuto, manteniendo el portaobjetos a temperatura ambiente.
5. Leer macroscópicamente tras 1 minuto sobre una luz difusa y no confundir las fibras de fibrina con la
   aglutinación.
6. Cualquier reacción débil debe ser repetida con el método en tubo.

PROCEDIMIENTOS (PARA LA DETECCIÓN DE LA CATEGORÍA D^VI)

Método antiglobulina indirecta

1. Preparar una suspensión de hematíes al 2-3% en PBS o solución salina isotónica.
2. Depositar en un tubo identificado: 1 volumen del reactivo Anti-D y 1 volumen de la suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente e incubar a 37 ºC durante 15 minutos.
4. Lavar los hematíes al menos una vez con PBS o solución salina isotónica cuidando de decantar la solución salina entre lavados y resuspendiendo el botón celular tras cada lavado. Tras el último lavado, decantar completamente la solución salina.
5. Añadir 2 gotas de antiglobulina humana o anti-IgG a cada botón celular seco.
6. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000 rcf (g) o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
7. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente.
8. Confirmar validez de todas las reacciones negativas con hematíes sensibilizados con IgG.

Método Bio-Rad ID (tarjetas LISS/COOMBS)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0,8% en ID-CellStab o ID-Diluent 2.
2. Retirar el papel de aluminio de tantos microtubos como sea necesario.
3. Colocar en un microtubo apropiado: 50 μL de suspensión de hematíes y 25 μL de reactivo Spinreact Anti-D.
4. Incubar las tarjetas 15 minutos a 37 ºC.
5. Centrifugar las tarjetas ID-Card en la centrífuga de tarjetas de gel Bio-Rad.
6. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método Ortho BioVue (tarjetas AHG/Coombs)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0.8% en Ortho 0.8% Red Cell Diluent.
2. Retirar el papel de aluminio de tantas cámaras de reacción como sea necesario.
3. Colocar en la cámara de reacción adecuada: 50 μL de suspensión de hematíes y 40 μL de reactivo Spinreact Anti-D.
4. Incubar las tarjetas 15 minutos a 37 ºC.
5. Centrifugar los casetes en una centrífuga Ortho BioVue System.
6. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Positivo: La aglutinación de los hematíes constituye un resultado positivo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la presencia del antígeno D en los hematíes testados.

Negativo: La ausencia de aglutinación de hematíes constituye un resultado negativo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la ausencia del antígeno D en los hematíes testados.

Los resultados de células que aglutinen con el control negativo deben excluirse, puesto que la aglutinación es probablemente causada por el efecto de los potenciadores macromoleculares del reactivo en células sensibilizadas.

ESTABILIDAD DE LAS REACCIONES

Leer los tests realizados en microplacas y tubos inmediatamente tras la centrifugación.

Las etapas de lavado deben completarse sin interrupción alguna y la centrifugación y lectura debe realizarse inmediatamente tras la adición del de la anti-globulina humana, ya que los retrasos pueden suponer la disociación de los complejos antígeno-anticuerpo, causando falsos negativos o resultados positivos débiles.

Los tests en porta deben ser interpretados en un máximo de 1 minuto a fin de asegurar la especificidad y evitar la posibilidad de que un resultado negativo sea incorrectamente interpretado como positivo debido al secado del reactivo.

Los resultados, de tests realizados a otras temperaturas de las aquí recomendadas, deben ser interpretados con cautela.

LIMITACIONES

El reactivo Spinreact Anti-D no es adecuado para su utilización con células tratadas enzimáticamente o suspendidas en LISS.

El uso de disoluciones diferentes a las descritas en los Procedimientos a la hora de preparar las suspensiones de hematíes tiene que ser validada previamente. Algunas disoluciones pueden dar lugar a falsos positivos o falsos negativos.

La sangre almacenada puede dar lugar a reacciones más débiles que la sangre fresca.

Puede observarse falsa aglutinación positiva en células sensibilizadas con IgG.

Puede también ocurrir falsos resultados positivos o negativos debido a:

• Contaminación de los materiales del test.
• Conservación inadecuada, concentración celular, tiempo o temperatura de incubación.
• Centrifugación inapropiada o excesiva.
• Desviación de los métodos recomendados.

El usuario es responsable del funcionamiento de los reactivos en cualquier otro método distinto de los aquí detallados.

Cualquier desviación de los métodos aquí recomendados debería ser validada antes de su utilización

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

Previamente a su liberación, cada lote de Spinreact Anti-D es testado usando los métodos listados en estas IDU. Las pruebas cumplieron con los requisitos establecidos en la versión/edición actual de las «Directrices para los servicios de transfusión de sangre en el Reino Unido» y las «Especificaciones técnicas comunes».

La especificidad en origen de los anticuerpos monoclonales está demostrada frente a un panel de hematíes antígenos-negativo.

La potencia del reactivo ha sido testado frente al estándar de referencia de potencia mínima Anti-D 99/836, obtenido del National Institute of Biological Standards and Controls (NIBSC).

El Control de Calidad de los reactivos se realizó utilizando hematíes con fenotipos que fueron verificados por un centro de transfusión de sangre del Reino Unido y habían sido lavados con PBS o solución salina isotónica antes de su uso.

CONTIENE

1×10 ml

GSIS04-E 15/11/21