Colinesterasa 20×3 ml

Determinación cuantitativa de colinesterasa (CHE).IVD.Conservar a 2-8ºC.

41,24 

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Descripción

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La colinesterasa hidroliza la butiriltiocolina a tiocolina y butirato. La tiocolina reacciona con el ácido 5.5´-ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) y forma ácido 5-mercapto-2-nitrobenzoico (5-MNBA), según el siguiente esquema de reacción:

Butiriltiocolina + H2O __Colinesterasa__→ Tiocolina + Butirato

Tiocolina + DTNB ____→ 5-MNBA

La velocidad de formación de 5-MNBA, determinado fotometricamente, es proporcional a la actividad enzimática de colinesterasa en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLÍNICO

La colinesterasa es una enzima presente en el plasma, sintetizada en el hígado. Su función fisiológica no se conoce claramente, aunque se le atribuye un papel importante como regulador de la concentración de la colina en el plasma.

La determinación de su actividad nos ayuda a evaluar la función hepática, detectar la exposición excesiva a pesticidas organofosforados e identificar pacientes con formas atípicas de la enzima que presentan una sensibilidad aumentada al anestésico succinilcolina. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

R1
Tampón
Fosfato pH 7,7, 50 mmol/L
R2
Substrato

Ác. 5,5-ditiobis-2-nitrobenzoico (5,5 DTNB), 0,25 mmol/L

Butiriltiocolina, 7 mmol/L

PREPARACIÓN

Reactivo de trabajo (RT): Disolver (→) un comprimido de R2 Substrato en un vial de R1 Tampón. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 2 horas a 2-8ºC.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD

Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.

No usar las tabletas si aparecen fragmentadas.

No usar reactivos fuera de la fecha indicada.

Indicadores de deterioro de los reactivos:

  • Presencia de partículas y turbidez.
  • Absorbancias (A) del Blanco a 405 ≥ 1,20.

MATERIAL ADICIONAL NO SUMINISTRADO

  • Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm.
  • Baño termostatizable a 25ºC, 30ºC ó 37º C (± 0,1ºC).
  • Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
  • Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRAS

Suero o plasma heparinizado1. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC.

PROCEDIMIENTO

Condiciones del ensayo:

  • Longitud de onda: 405 nm.
  • Cubeta: 1 cm paso de luz.
  • Temperatura constante: 25ºC / 30ºC / 37ºC.

Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.

Pipetear en una cubeta:

 
25º – 30ºC
37ºC
RT (mL)
1,5
1,5
Muestra (µL)
10
Muestra diluida 1/2 con ClNa 9 g/L (µL)
10

Mezclar y esperar 30 segundos.

Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada 30 segundos durante 1,5 min.

Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por intervalo de 30 segundos (ΔA/30 s).

CÁLCULOS

25º- 30ºC → ΔA / 30 s x 22710 = U/L

37ºC → ΔA / 30 s x 45420 = U/L

Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 µmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L).

Factores de conversión de temperaturas
Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:

Temperatura de medición
Factor para convertir a
25ºC
30ºC
37ºC
25ºC
1,00
1,24
1,55
30ºC
0,81
1,00
1,26
37ºC
0,64
0,80
1,00

CONTROL DE CALIDAD

Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: Spintrol H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.

Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA

25ºC
30ºC
37ºC
3000 – 9300 U/L
3714 – 11513 U/L
4659 – 14443 U/L

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

Rango de medida (a 37ºC):
Desde el límite de detección 7 U/L hasta el límite de linealidad 9084 U/L.

Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.

Precisión:

 
Intraserie (n= 20)
Interserie (n= 20)
Media (U/L)
5992
3087
6277
3254
SD
70
56
51
66
CV (%)
1,17
1,82
0,80
2,03

Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,0002 ΔA/30 s.

Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).

Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de correlación (r)2: 0,9799.
Ecuación de la recta de regresión: y = 0,994x + 3,463.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.

INTERFERENCIAS

La hemólisis moderada no interfiere en los resultados1,2. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la colinesterasa.

PRESENTACIÓN

R1: 20 x 3 mL, R2: 20 → 3 mL

BEIS05-E 08/01/16

Información adicional

Peso 0,309 kg
Marca

Spinreact

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