Verde de malaquita 2×100 ml

Descripción

PRINCIPIO

La formación de endosporas es una estrategia de supervivencia de ciertas bacterias. Las endosporas son formas de resistencia que se generan ante condiciones ambientales desfavorables (temperaturas extremas, falta de nutrientes, compuestos tóxicos, etc.). La espora puede perdurar durante años hasta que el ambiente es favorable, germinando y generando una nueva forma vegetativa.

La tinción mediante Verde de Malaquita permite detectar la presencia de microorganismos con esporas. La localización de las esporas, así como la proporción entre esporas y células vegetativas proporciona información acerca del microorganismo en estudio.

La gruesa pared externa de queratina de la espora es resistente al calor y a la tinción con diversos colorantes. Para forzar la tinción con el Verde de Malaquita se utiliza calor. Una vez el colorante ha penetrado en el interior de la espora, se retira la preparación de la fuente de calor y se elimina el colorante de las células vegetativas por un simple lavado con agua. La espora retiene el colorante y queda teñida de color verde. Como colorante de contraste, para la tinción de las células vegetativas, se utiliza Safranina.

Para una identificación completa se recomienda la realización de tests bioquímicos y serológicos.

USO PREVISTO

Familia de productos sanitarios para diagnóstico in vitro para tinción de endosporas en microbiología.

Son colorantes cualitativos que dan información sobre el estado fisiológico o patológico de la muestra de tejido cuando la tinción obtenida es interpretada por profesional cualificado. Para obtener un diagnóstico, los resultados se han de evaluar en el contexto de los antecedentes médicos, el estado físico y el resto de datos clínicos y de laboratorio obtenidos.

Para uso profesional de laboratorio.

COMPOSICIÓN

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD

Los reactivos almacenados a 15-30ºC y protegidos de la luz, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los envases deben mantenerse siempre bien cerrados.

El paso del tiempo y temperaturas inferiores a 15ºC, pueden provocar la aparición de un ligero precipitado en algún reactivo, que no afecta a la funcionalidad del producto. Se aconseja atemperar el reactivo a 15-30ºC, agitar y filtrar el colorante antes de su uso.

La estabilidad en uso debe ser determinada por cada usuario según su criterio.

MATERIAL NO SUMINISTRADO

Material de uso general de laboratorio.

Portaobjetos y cubreobjetos, mechero Bunsen, asa de siembra, cubetas de tinción, papel secante, papel de filtro, microscopio con lente de inmersión.

PRECAUCIONES

Los reactivos se deben manipular con precaución. Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local vigente.

Cualquier incidente grave relacionado con el producto deberá comunicarse a QCA y a la autoridad competente del estado en el que esté establecido el usuario.

CONTROL DE CALIDAD

Se recomienda seguir las prácticas de control de calidad marcadas por los organismos internacionales y realizar tinciones de forma periódica con preparaciones de control de calidad con microorganismos ATCC para este fin.

MUESTRA

Extensiones bacterianas procedentes de diversos fluidos corporales como exudados, fluidos pulmonares, esputos, sedimentos de orina, cultivos bacterianos, etc.

La manipulación de las muestras debe realizarse de acuerdo con los protocolos establecidos en cada laboratorio para la preparación de muestras, siguiendo el estado del arte vigente. Extender la muestra con un asa en un portaobjetos directamente o mezclando con solución salina para conseguir un frotis uniforme y delgado. Secar al aire y fijar con calor pasando el portaobjetos por una pequeña llama entre 2 y 3 veces. Dejar enfriar el portaobjeto antes de realizar la tinción.

Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO

El colorante está listo para su uso.

PROCEDIMIENTO

1. Cubrir la extensión con el Reactivo A, Verde de Malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5-7 minutos. Evitar que la muestra hierva. Añadir más colorante si éste se evapora. Es importante que la muestra no se seque.
2. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
3. Teñir la extensión con el Reactivo B, Safranina, que es el colorante de contraste, durante 1 minuto.
4. Lavar con agua corriente y secar al aire.
5. Examinar al microscopio con objetivo de inmersión.

Cada usuario debe validar este procedimiento en su laboratorio para ajustarlo a su metódica estándar, aplicando las diversas variantes de este procedimiento, tanto manual como automático, que le permita optimizar los resultados. Se debe tener en cuenta que la intensidad de la coloración es proporcional al tiempo de tinción.

RESULTADOS

Endosporas: Verde.

Células vegetativas: rosa-rojo.

NOTAS

El resultado de la tinción es orientativo y debe confirmarse con pruebas adicionales adecuadas. Los resultados de coloración indicados son orientativos ya que la intensidad y la tonalidad del color pueden ser influenciados por diferentes factores como son la fijación o el tiempo de tinción (la intensidad de la coloración es proporcional al tiempo de tinción).

CONTIENE

Reactivo A: Verde de Malaquita 1 x 100 ml

Reactivo B: Safranina O 1 x 100 ml

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