Negro sudán kit 2×100 ml

Descripción

PRINCIPIO

El Sudán Negro B es un colorante de la serie diazoica que tiñe diversos lípidos, incluyendo grasas neutras, esteroles y en particular fosfolípidos. Los vapores de formaldehído (fijador) fijan las grasas y fosfolípidos, los que al contactar con el colorante toman un color negro-azul que contrasta con el colorante de Wright usado en la contratinción. El colorante es insoluble en un medio acuoso celular pero se solubiliza en el medio lipídico de ciertos gránulos, que quedan teñidos en color verde oscuro, casi negro.

Los gránulos lipídicos de color negro aparecen en todos los granulocitos, intensificándose al pasar de los mieloblastos a los ganulocitos maduros. Los gránulos lipídicos también se presentan en los cuerpos de Auer y en los monocitos, en los que aparecen como fina dispersión citoplasmática. Linfocitos, linfoblastos y eritoblastos son negativos al Negro Sudán.

En hematología, se utiliza para el diagnóstico de leucemias permitiendo la discriminación entre leucemia monocítica y granulocítica.

UTILIDAD DIAGNÓSTICA

Para la tinción de lípidos en muestras de sangre, médula ósea y tejidos.

COMPOSICIÓN

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD

Los reactivos almacenados a 15-30ºC y protegidos de la luz, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los envases deben mantenerse siempre bien cerrados.

Con el tiempo, puede aparecer un ligero precipitado en algún reactivo, que no afecta a la funcionalidad del producto.

MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO

Material de uso general de laboratorio.
Láminas para la extensión de la sangre.
Sistema, manual o automático, de tinción.
Microscopio.

PRECAUCIONES

Los productos son para uso profesional. Todos los reactivos deben manipularse con precaución por personal técnico formado. Se aconseja consultar antes de su uso la ficha de datos de seguridad.

La eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa local vigente.

CONTROL DE CALIDAD

Se recomienda seguir las prácticas de control de calidad marcadas por el CLSI (antes NCCLS). Realizar los controles con microorganismos ATCC para este fin o cultivos de microorganismos ácido-alcohol resistentes y no resistentes conocidos.

MUESTRA

Extensiones de sangre secadas al aire. Cortes histológicos. Se recomienda que sean finas y homogéneas para obtener una mejor fijación del colorante sin sobrecoloraciones.

Para obtener buenos resultados se aconseja realizar la tinción durante las dos horas siguientes a la preparación. Las extensiones viejas, pueden teñirse de forma irregular.

Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO

Mezclar a partes iguales, justo antes de su utilización, los reactivos A (Negro Sudan) y B (Fenol tamponado).

PROCEDIMIENTO

Para HISTOLOGIA:

1. Fijar el frotis al aire. En caso de cortes histológicos, deshidratar previamente con propilenglicol durante 2–3 minutos.
2. Teñir con el reactivo de trabajo durante 5–7 minutos los cortes de tejido y hasta 10 minutos los frotis.
3. Diferenciar con propilenglicol o xileno durante 2–3 minutos.
4. Dejar secar al aire.
5. Lavar con agua del grifo durante 3-5 minutos para los cortes histológicos y unos 30 segundos para los frotis y dejar secar al aire.
6. Examinar al microscopio.

Para HEMATOLOGÍA:

1. Realizar un frotis sanguíneo de la forma habitual.
2. Teñir durante 60 minutos con el reactivo de trabajo.
3. Lavar con etanol al 70% durante 2 ó 3 minutos. Lavar y secar al aire.
4. Contrateñir con colorante de Wright durante 5 minutos.
5. Lavar con agua y dejar secar al aire.
6. Examinar al microscopio. Observar con objetivo de inmersión, clasificando 100 células como Sudán Negro B positivas o negativas. Las células Sudán Negro B positivas presentan una coloración negra en su citoplasma.

RESULTADOS

Compuestos lipídicos: Coloración verde oscura-negra.
Citoplasma: sin teñir.

En la sangre normal, los granulocitos se tiñen con el Sudán Negro B; los monocitos se tiñen débilmente o no se tiñen, en cambio los linfocitos siempre son negativos a esta tinción. Esta reacción es de gran utilidad y especificidad en la identificación de LAM (Leucemia Mieloblástica Aguda), ya que en forma típica los elementos granulocíticos, desde mieloblastos (incluyendo Cuerpos de Auer) hasta polisegmentados (incluso basófilos y eosinófilos), presentan granulación gruesa de color negro en su citoplasma.

NOTAS

Cada usuario puede aplicar las diversas variantes de este procedimiento, tanto manual como automático, que se ajuste a su metódica estándar. Si se usa agua corriente para el lavado tener presente que aguas intensamente cloradas pueden debilitar la coloración.

CONTIENE

Negro Sudan, 100mL.
Fenol tamponado, 100 mL.

PRO4-9_NEGSUD_3