Descripción
PRINCIPIO
La mieloperoxidasa es un enzima ampliamente distribuido en el organismo y sus fuentes fundamentales las constituyen los leucocitos (neutrófilos y monocitos) y los macrófagos. Este enzima se combina in vivo con peróxido de hidrógeno transformándose en un potente agente bactericida, viricida y fungicida. La demostración citoquímica de este enzima se basa en su reacción con la pironina en presencia de alfa-naftol y agua oxigenada, produciendo un compuesto de color rojo intenso que permanece en la célula después del lavado con agua. Para la tinción de los núcleos se utiliza la Hematoxilina de Mayer.
Diversos procesos patológicos están asociados al incremento de la actividad de la mieloperoxidasa, como en el caso de las enfermedades infecciosas, las enfermedades inflamatorias como la artritis reumatoide y la isquemia.
En hematología, se utiliza para el diagnóstico de leucemias permitiendo la discriminación entre células mieloides y linfoides Un déficit de mieloperoxidasa en los polimorfonucleares maduros, excepto en el caso de que se trate de una deficiencia congénita, debe interpretarse como un signo disgranulopoyético.
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
Para la tinción diferencial de granulaciones mieloperoxidásicas en extensiones de sangre periférica y médula ósea.
REACTIVOS
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Reactivo A
Disolución fijadora
1 x 100 mL |
Formol (37 – 40%) 10%
Etanol 90 %
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Ref. 990816
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Reactivo B
Alfa-Naftol
1 x 25 mL
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Disolución alcohólica de alfa-Naftol 0,5 %
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Ref. 990817
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Reactivo C
Pironina Y
1 x 100 mL
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Tampón Tris pH 7,5 20 mM
NaCl 500 mM
Pironina Y 0,15%
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Ref. 990818
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Reactivo D
Peróxido de Hidrógeno
1 x 5 mL
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Ref. 990819
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Reactivo E
Hematoxilina de Mayer
1 x 100 mL
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Hematoxilina CI nº 75 290 0.5%
Sulfato Aluminio y Amonio 5%
Yodato sódico 0,02%
Glicerina 30%
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Ref. 990820
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PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO
Mezclar, justo antes de su utilización, la cantidad necesaria en la proporción: 1 ml del reactivo B + 4 ml del reactivo C + una gota (50 µl) del reactivo D.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Los reactivos almacenados a 15-30ºC y protegidos de la luz, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los envases deben mantenerse siempre bien cerrados.
Con el tiempo, puede aparecer un ligero precipitado en algún reactivo, que no afecta a la funcionalidad del producto.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
- Material de uso general de laboratorio.
- Láminas para la extensión de la sangre.
- Sistema, manual o automático, de tinción.
- Microscopio.
PRECAUCIONES
Los productos son para uso profesional. Todos los reactivos deben manipularse con precaución por personal técnico formado. Se aconseja consultar antes de su uso la fi cha de datos de seguridad.
La eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
MUESTRA
Extensiones de sangre secadas al aire. Se recomienda que sean finas y homogéneas para obtener una mejor fijación del colorante sin sobrecoloraciones. Para obtener buenos resultados se aconseja realizar la tinción durante las dos horas siguientes a la preparación. Las extensiones viejas, pueden teñirse de forma irregular.
Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda seguir las prácticas de control de calidad marcadas por el CLSI (antes NCCLS). La metódica de tinción indicada es la utilizada de rutina en nuestros laboratorios.
PROCEDIMIENTO
- Fijar el frotis durante 1 minuto en el reactivo A.
- Lavar con agua del grifo y dejar secar al aire.
- Teñir con el reactivo de trabajo durante 3 minutos.
- Lavar con agua del grifo y dejar secar al aire.
- Teñir con el reactivo E, hematoxilina de Mayer, durante 3 minutos.
- Lavar con agua del grifo durante 3 minutos y dejar secar al aire.
- Examinar al microscopio.
RESULTADOS
Granulaciones peroxidásicas: rojo fuerte.
Núcleos de los leucocitos: azul.
Hematíes: beige claro.
NOTAS
Cada usuario puede aplicar las diversas variantes de este procedimiento, tanto manual como automático, que se ajuste a su metódica estándar.
Si se usa agua corriente para el lavado tener presente que aguas intensamente cloradas pueden debilitar la coloración.
Revisión: 03.2018 PRO4-9_MIPOD_3
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