Descripción
PRINCIPIO DEL TEST
A pH alcalino, el sustrato de lipasa 1,2-O-dilauril-rac-glicero-3-ácido glutárico-(6-metilresorufina)-éster se desdobla por acción de la lipasa pancreática, formándose 1,2–O–dilauril–rac-glicerol y ácido glutárico-(6–metilresorufi na)-éster, que es un producto inestable. Éste, en solución alcalina, se transforma espontáneamente en ácido glutárico y metilresorufina, cuya intensidad de color a 578nm es directamente proporcional a la actividad de la lipasa presente en la muestra.
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
La lipasa se encuentra elevada en pancreatitis de cualquier origen, y estos valores permanecen elevados durante más tiempo que los de la amilasa. En alteraciones crónicas del páncreas se encuentra un valor elevado de lipasa y lo mismo ocurre en casos de cirrosis biliar primaria, insuficiencia renal crónica y en pacientes en hemodiálisis.
Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los resultados se han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de laboratorio obtenidos.
REACTIVOS
A 1 x 50 mL Disolución tampón Ref. 991120.
B. 1 x 30 mL Sustrato Ref. 991215.
C. 1 x 1 mL Estándar liofilizado Ref. 991307.
La concentración viene indicada en la etiqueta del vial.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO
Los reactivos A y B, están listos para su uso.
El estándar liofilizado se debe rehidratar con 1 mL de agua desionizada.
COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS
Las concentraciones de los reactivos son:
A. Disolución tampón:
Tampón Bicina pH 8,0 50 mM.
Colipasa ≥ 1 mg/L.
Desoxicolato Na 1,8 mM.
Cloruro cálcico 12 mM.
B. Substrato:
Tampón Tartrato pH 4,0 12 mM.
1,2-O-dilauril-rac-glicero-3-ácido glutárico-(6-metilresorufina)-éster 0,27 mM.
Taurodesoxicolato 9,0 mM.
Estabilizantes y conservantes.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Los componentes del kit almacenados a 2-8ºC, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
El calibrador una vez rehidratado, bien tapado y conservado a 2-8ºC es estable 28 días ó 3 meses a -20ºC. Una vez descongleado no volver a congelar.
El producto debe ser utilizado correctamente, evitando el riesgo de contaminación en todo momento. Una manipulación inadecuada exime a QCA de cualquier responsabilidad.
Indicaciones de alteración de los reactivos:
Presencia de turbidez o de partículas.
Blanco del reactivo de trabajo ≥0,500.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
Material común de laboratorio.
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro termostatizado a 37ºC.
Cubeta de 1cm de paso de luz.
MUESTRA
Suero o plasma heparinizado.
No emplear plasma con EDTA. Utilizar muestras exentas de hemólisis.
La actividad lipásica en suero es estable 4 días a 2-8ºC y 24 horas a temperatura ambiente (≤ 25ºC).
PRECAUCIONES
Los reactivos contienen azida sódica al 0,09%, manipular con precaución.
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos.
El calibrador debe considerarse como una muestra humana y por lo tanto potencialmente infeccioso. Utilizar protección adecuada. Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo.
La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
CONTROL DE CALIDAD
Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 994148 / 996571) y Seriscann Anormal (Ref. 994685 / 999329) en cada proceso de medida para verificar los resultados. Se recomienda calibrar con el Calibrador para Autoanalizadores (Ref. 996280) siempre que se cambie el lote de reactivo y/o calibrador y/o los sueros control no entren dentro de los márgenes.
AUTOANALIZADORES
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos están disponibles bajo demanda.
PROCEDIMIENTO
Atemperar el reactivo de trabajo y llevar el instrumento a 37ºC
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Técnica |
BL mL
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PR mL
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ST mL
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Agua
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0,01
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—
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—
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Muestra
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—
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0,01
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—
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Estándar
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—
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—
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0,01
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Reactivo A
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1,00
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1,00
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1,00
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Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC
Adicionar seguidamente el reactivo B
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Reactivo B
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0,60
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0,60
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0,60
|
Mezclar bien. Al cabo de 60s leer la absorbancia Abs1.
Pasados 90s más, leer de nuevo la absorbancia Abs2.
(ΔAbs PR – ΔAbs BL / ΔAbs ST – ΔAbs BL) x Conc. ST (U/L) = U/L
Suero, plasma: ˂ 38 U/L.
Los valores indicados son a título orientativo. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del sistema de lectura manual o automático empleados.
Los siguientes datos se han obtenido manualmente:
Sensibilidad, como límite de detección: 6,9 U/L.
Linealidad: La reacción es lineal hasta 300 U/L. Sin embargo para concentraciones superiores diluir la muestra 1/5 con disolución salina y multiplicar el resultado por 5.
Exactitud, como % de recuperación: 104%.
Precisión en la serie, como Coeficiente de Variación: 3,01%.
Precisión entre series, como Coeficiente de Variación: 3,65%.
Veracidad: Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias significativas al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están disponibles bajo demanda.
Se recomienda el uso de material desechable para la realización del ensayo.
Evitar el uso de muestras hemolizadas.
La hemoglobina interfiere a partir de 125 mg/dL, la bilirrubina a partir de 20 mg/dL y los triglicéridos a partir de 625 mg/dL.
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