Legionella GVPC Agar Selectivo, 20 Placas

Descripción

FÓRMULA TEÓRICA

• Tampón ACES 10 g/L.
• Cetoglutarico 1 g/L.
• L-Cisteína clorhidrato 0,4 g/L.
• Extracto de Levadura 10 g/L.
• Carbón activo 3,5 g/L.
• Hidróxido de potasio 2,8 g/L.
• Agar Bacteriológico 13 g/L.
• Cicloeximida 0,08 g/L.
• Glicina 3 g/L.
• Pirofosfato de hierro 0,25 g/L.
• Polimixina B 80.000 UI
• Vancomicina 0,001.
• pH. 6,8 ±0,2.

DESCRIPCIÓN Y USOS

Desde el descubrimiento de Legionella pneumophila, se han diseñado diversos medios para su aislamiento y propagación después de múltiples variaciones. El medio (BCYE), según la formulación propuesta por Eldestein, es uno de los más adecuados para el cultivo de las especies del género Legionella.

La base del medio está elaborada con extracto de levadura, carbón activo y agar. Esta base, tamponada con ACES y suplementada con pirofosfato férrico, L-cisteína, y Cetoglutarato aporta los elementos necesarios para el crecimiento de las legionelas. El uso de medio base requiere, por lo tanto, suplementación obligada de estos elementos para lograr crecimiento de Legionella.

Aunque existen diversos suplementos para convertir el medio en selectivo en este caso se trata del suplemento conocido como GVPC, descrito por Dennis y col., este medio contiene Glicina y antimicrobianos adecuados tanto para el crecimiento de estos microorganismos como para su aislamiento y enumeración a partir de muestras poco contaminadas o aguas potables. Este medio es el recomendado cuando se emplean pretratamientos ácidos o por calor.

En este medio las especies de Legionella causantes de infección en el hombre crecen bien a las 48-72 horas, aunque la incubación debe mantenerse hasta 10 días antes de descartar los cultivos como negativos.

El aspecto blanco grisáceo o azulado de las colonias, aunque ligeramente diferente según las especies, es característico y para su identificación presuntiva han de resembrarse en el medio (BCYE) y en agar sangre (TSA) observándose crecimiento solamente en el primero. La tinción mediante el método de Gram, utilizando fucsina como colorante de contraste, permite reconocer su morfología de bacilo gramnegativo fino y pleomórfico.

La identificación definitiva debe hacerse siguiendo las técnicas estandarizadas en el laboratorio.

UTILIZACIÓN

Antes de la siembra es recomendable que las placas alcancen la temperatura ambiente. La superficie debe estar húmeda pero no mojada. La fusión del medio preparado al baño maría para su fluidificación y preparación de placas Petri 90, debe hacerse con precaución para evitar el excesivo deterioro de productos termolábiles que contiene como el Pirofosfato férrico o los antibióticos.

Las placas para la resiembra y propagación de las legionelas se utilizan según técnicas convencionales.

Las placas deben incubarse a 36±2ºC en atmósfera con CO₂ al 5%. Mantener la incubación durante 7-10 días antes de descartar las placas como negativas.

Diversas especies de Legionella son potencialmente patógenas para el hombre. Debe evitarse la formación de aerosoles y trabajar preferentemente en cabinas protectoras adecuadas.

CONSERVACIÓN

Las placas han de conservarse a temperaturas entre 4-15ºC, siempre en su caja de embalaje para preservarlas de la luz. La fecha de caducidad está indicada en las placas.

CONTROL DE CALIDAD