Descripción
DESCRIPCIÓN
Sistema listo para el uso, con medios de cultivo solidificados sobre un soporte plástico, para la búsqueda de hongos dermatofitos.
Estos sistemas se conocen universalmente como dip-slide. Los resultados se pueden emplear como ayuda para el diagnóstico de las infecciones del cutis y han de utilizarse junto a los datos del historial del paciente.
MEDIOS INCLUIDOS
- Malt Agar (ámbar).
- Corn Meal Agar (blanco).
- Dermatophyte Test Medium Agar (anaranjado).
PRINCIPIO DEL MÉTODO
DERMATEST inoculado con un tampón de recolección, que contiene material clínico, consiente la búsqueda de hongos dermatofitos. Dermathophyte Test Medium Agar está preparado según la fórmula de Taplin, Zaias y Rebbell y consiente el aislamiento selectivo rápido de hongos dermatofitos responsables de lesiones de la piel, de las uñas y del cabello como Microsporum spp., Trichophyton spp. y Epidermophyton spp. Los agentes selectivos del terreno, como cicloeximida, gentamicina y clortetraciclina consienten eliminar totalmente las contaminaciones bacterianas y reducir notablemente las contaminaciones de los hongos saprófitos, permitiendo al mismo tiempo una elevada tasa de aislamiento de los dermatofitos. La identificación de los dermatofitos sobre este terreno se basa en el uso del rojo fenol como indicador de pH. Los dermatofitos producen metabolitos alcalinos que causan un viraje del color del indicador del amarillo hacia el rojo. La fiabilidad de esta característica como mecanismo diferencial ha sido confirmada en diferentes estudios por Allen, Carrol, Taplin et al. que obtienen una exactitud del 97-100% en la identificación de los dermatofitos con Dermathophyte Test Medium. El terreno consiente efectuar un diagnóstico de dermatofitos después de al menos 48 horas de incubación. Malt Agar se emplea para el aislamiento de hongos patógenos oportunistas como Aspergillus spp., Fusarium spp., Mucor spp., Rhizopus spp., de muestras de origen clínica para el aislamiento de los patógenos sensibles a la cicloeximida (Allescheria boydii y Cryptococcus neoformans). Corn Meal Agar es un terreno adecuado para el aislamiento de Candida albicans. Cuando se observan al microscopio colonias de Candida albicans crecidas en este terreno, se nota la producción de características clamidosporas, criterio aceptado para la identificación morfológica de esta especie (Prospero and Reyes).
RECOLECCIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS
El material sacado de lesiones de la piel, de los cabellos y de las uñas, tiene que ser sembrado en la superficie de los dos terrenos asegurando su buena adherencia al terreno.
PROCEDIMIENTO DEL TEST
- Sacar un dip-slide del contenedor.
- Identificar la muestra con etiqueta adhesiva o escribiendo los datos directamente en el contenedor del dip-slide.
- Desenroscar y extraer el slide del contenedor cilíndrico sin tocar las superficies de los terrenos de cultivo.
- Teniendo el slide por el tapón, sembrar directamente las superficies de los terrenos de cultivo con un tampón de recolección, que contiene material clínico procedente de lesiones cutáneas y otro.
- Volver a introducir el slide en el contenedor y volver a cerrar enroscando.
- Incubar en un termostato regulado a 25-30°C por 48 horas hasta un máximo de 7 días en aerobiosis.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Después de la incubación la presencia de los dermatofitos es evidenciada por la aparición de colonias en las superficies de los terrenos de cultivo. En Dermatophyte Test Medium Agar los hongos dermatofitos se desarrollan con una coloración roja alrededor de las colonias. Para los dermatofitos de crecimiento rápido se tiene la aparición del color rojo después de 48 horas de incubación; para los dermatofitos de crecimiento lento se necesitan de 3 a 7 días de incubación. Cuando se tienen colonias pequeñas, el color rojo queda limitado al área en las inmediatas cercanías de la colonia; cuando las mismas son de crecimiento confluente y considerable ocurre el viraje del color del indicador a lo largo de todo el terreno. Los hongos saprófitos normalmente no crecen en Dermatophyte Test Medium Agar excepto cuando la muestra está fuertemente contaminada; en este caso se tienen crecimientos más tardíos, características para el color de las colonias (negras para Aspergillus niger y Cladosporium spp., verde para Penicillum spp.) a veces con viraje del color del terreno hacia el rojo: Candida albicans se desarrolla sin viraje del color del terreno. En Malt Agar y Corn Meal Agar, los mismos microorganismos cultivan con las características cromáticas típicas del hongo filamentoso aislado.
CONTROL CALIDAD
Para el control calidad del DERMATEST, los dip-slide son inoculados con caldos de cultivo de cepas microbianas indicadas en la siguiente tabla.
- Dimensión de la inoculación para productividad: 10-100 UFC/ml.
- Dimensión de la inoculación para selectividad: 104-105 UFC/ml.
- Dimensión de la inoculación para especificidad: 104 UFC/ml.
- Condiciones de incubación: 25-30°C por 48-96 h en aerobiosis.
Los resultados se interpretan como descrito en la siguiente tabla. Además se controla el aspecto de los terrenos: para el color de los terrenos hacer referencia al apartado «medios incluidos».
Cepas microbianas | MALT AGAR | CORN MEAL AGAR | DTM AGAR |
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Escherichia coli ATCC 25922
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colonias incoloro
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colonias incoloro
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crecimiento inhibido
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Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
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colonias incoloro
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colonias incoloro
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crecimiento inhibido
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Candida albicans ATCC 10231
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colonias blanco
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colonias blanco
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colonias blanco
(terreno no cambia color) |
Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533
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colonias blanco
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colonias blanco
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colonias blanco
(terreno cambia hacia rojo) |
Aspergillus niger ATCC 16404
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colonias negro
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colonias negro
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crecimiento inhibido
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PRECAUCIONES
Los terrenos aquí descritos no están clasificados como peligrosos según la legislación vigente ni contienen sustancias nocivas en concentraciones ≥1%, por lo tanto no requieren la disponibilidad de la Ficha de Seguridad. Los Dermatest son dispositivos desechables. DERMATEST es sólo para uso diagnóstico in vitro, está destinado a un ámbito profesional y tiene que ser usado en laboratorio por operadores adecuadamente formados, con métodos aprobados de asepsia y seguridad con respecto a los agentes patógenos.
CONSERVACIÓN DIP- SLIDE
Conservar a 10-25°C en sus estuches originales que protegen de la luz. Evitar conservar cerca de fuentes de calor y evitar excesivas variaciones de temperatura. En estas condiciones los productos descritos aquí son válidos hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar después de esta fecha. Eliminar si hay signos de deterioro antes del uso (vistosos virajes del color de los terrenos, deshidratación o separación de los terrenos del soporte, presencia de colonias bacterianas u hongos). NO CONGELAR.
ELIMINACIÓN DEL MATERIAL UTILIZADO
Después de la utilización DERMATEST y el material que ha entrado en contacto con la muestra en examen tienen que ser descontaminados y eliminados de acuerdo con las técnicas en uso en laboratorio para la descontaminación y la eliminación de material potencialmente infecto.
CONTIENE
10 Dip-Slide
F01013 Rev.3 / 15.04.2011
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