Descripción
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El anticuerpo anti CK-M inhibe completamente la actividad de la CK-MM y la subunidad (M) de la CK-MB. La actividad de la CK-B no inhibida se determina según las siguientes reacciones:
Fosfocreatina + ADP ___CK__→ Creatina + ATP
ATP + Glucosa ___HK__→ ADP + Glucosa-6-fosfato
Glucosa-6-fosfato + NADP+ ___G6F-DH__→ 6-Fosfogluconato + NADPH + H+
La velocidad de formación de NADPH, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de CK-B en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La CK-MB es una enzima compuesta de dos subunidades, la subunidad M expresada en el músculo y la subunidad B, expresada en las células nerviosas.
La CK-MB se encuentra en el suero en concentraciones bajas, se incrementa como consecuencia de un infarto de miocardio y después desciende a niveles normales. Puede incrementarse, más raramente, en traumatismos del músculo esquelético5,6. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
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R 1
Tampón |
Imidazol pH 6,7 100 mmol/L
Glucosa 20 mmol/L
Acetato de magnesio 10 mmol/L
EDTA 2 mmol/L
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R 2
Anti CK-M
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*Anti CK-M 2000 U/L
ADP 2 mmol/L
AMP 5 mmol/L
di-Adenosina-5- pentafosfato 10 mmol/L
NADP+ 2 mmol/L
Hexoquinasa (HK) 2500 U/L
Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH) 1500 U/L
N-acetilcisteína 20 mmol/L
Fosfato de creatina 30 mmol/L
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*Anti CK-M suficiente para inhibir hasta 2000 U/L de CK – MM
Opcional
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CK-Nac / CK-MB CONTROL |
Suero humano liofilizado Ref: 1002260
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PRECAUCIONES
R1: H360-Puede perjudicar la fertilidad o dañar al feto.
Seguir los consejos de prudencia indicados en la FDS y etiqueta del producto.
CK-NAC / CK-MB CONTROL Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT):
Disolver ( → ) un comprimido de R2 en un vial de R1. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 8 días a 2-8ºC o 24 horas a 15-25ºC.
CK-Nac / CK-MB CONTROL:
Reconstituir ( → ) el contenido de un vial con 2 mL de agua destilada. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 5 días a 2-8ºC o 4 semanas a -25ºC – -15ºC.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
No usar las tabletas si aparecen fragmentadas.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias (A) del Blanco a 340nm ≥ 1,6.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340nm.
- Baño termostable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC).
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero o plasma. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC, protegida de la luz.
La actividad de la CK-MB en el suero disminuye un 10% tras 24 horas a 4ºC o tras 1 hora a 25ºC.
PROCEDIMIENTO
Condiciones del ensayo:
- Longitud de onda: 340nm.
- Cubeta: 1 cm paso de luz.
- Temperatura constante 25ºC / 30ºC / 37ºC.
Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
Pipetear en una cubeta:
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RT (mL) |
1,0
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Muestra (μL)
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40
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Mezclar. Incubar 10 minutos.
Leer la absorbancia (A1) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia de nuevo a los 5 minutos (A2).
Calcular la diferencia de absorbancias: ΔA= A2 – A1.
CÁLCULOS
ΔA x 825 = U/L de CK-B
ΔA x 1651 = U/L de CK-MB
El factor de cálculo en analizadores automáticos por método cinético (ΔA/min) es 8255 de CK-MB.
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 ?mol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L).
Porcentaje de actividad de la CK-MB:
(Actividad de la CK-MB / Actividad de laCK Total) x 100 = % de actividad de la CK-MB
Factores de conversión de temperaturas
Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:
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Temperatura
de medición |
Factor para convertir a
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25ºC
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30ºC
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37ºC
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25ºC
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1,00
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1,53
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2,38
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30ºC
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0,65
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1,00
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1,56
|
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37ºC
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0,42
|
0,64
|
1,00
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CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente utilizar controles de sueros específicos CK-Nac/CK-MB (Ref. 1002260).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA
La probabilidad de un infarto de miocardio es elevada en las siguientes condiciones:
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25ºC
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30ºC
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37ºC
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CK-MB
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> 10 U/L
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> 15 U/L
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> 24 U/L
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La actividad de la CK-MB se encuentra entre 6 y 25% de la actividad total de la CK. Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Rango de medida: Límite de detección: 3,11 U/L.
Linealidad: Antes de efectuar la determinación de CK-MB, se determinará la actividad de CK Total mediante el método CK-NAC activado. Si la actividad de CK es superior a 1000 U/L, las muestras, para la determinación de CK-MB, deberán diluirse a 1:2 con NaCL al 0.9 % y multiplicar el resultado calculado por 2.
Precisión:
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Intraserie (n= 20)
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Interserie (n= 20)
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Media (U/L)
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54,2
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138,3
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55,7
|
141,6
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SD
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1,45
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1,33
|
1,62
|
1,39
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CV (%)
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2,67
|
0,96
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2,92
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0,98
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Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,00029 ΔA / min.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de regresión (r)2: 0,996.
Ecuación de la recta de regresión: y= 0,9919x – 0,1042.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS
Las muestras extremadamente hemolizadas interfieren en el ensayo. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la CK-MB.
PRESENTACIÓN
R1: 19 x 2,5 mL, R2: 19 → 2,5 mL, CONTROL: 1 x 2 ml
BEIS04-E 10/12/15
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