CCA Agar, 20 placas

Descripción

FÓRMULA TEÓRICA

• Cloruro sódico 5 g/l.
• Hidrogenofosfato disodico 2,7 g/l.
• Dihidrogenofosfato de sodio x 2 H₂O 2,2 g/l.
• Extracto levadura 2 g/l.
• Digerido enzimático de caseína 1 g/l.
• Piruvato sódico 1 g/l.
• Sorbitol 1 g/l.
• Triptófano 1 g/l.
• Salmon-beta-D-galactosido 0,2 g/l.
• Tergitol® 15-S7 surfactante 0,15 g/l.
• X-beta-G-glucorónido CHX sal 0,10 g/l.
• IPTG 0,10 g/l.
• Agar bacteriológico 10 g/l.
• pH 6,8 ±0,2.

DESCRIPCIÓN Y USOS

CCA agar es un medio selectivo y recomendado por la ISO 9308-1 para la detección de E. coli y otros coliformes en muestra de agua y alimentos. La interacción de los ingredientes en el medio como la peptona, el sorbitol, etc., garantiza un rápido crecimiento incluyendo los coliformes patógenos. El Tergitol inhibe las bacterias Gram positivas, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y las sales de fosfato actúan como un sistema tampón. La mezcla cromogénica contiene substratos como el Salmon-Gal y el X-glucorónido que son degradados por las enzimas (ej. Galactosidasa, glucoronidasa) producidas por las bacterias dando lugar a la distinta coloración de las colonias. La enzima ?-D-galactosidasa rompe el substrato Salmon-Gal dando lugar a una coloración de salmón a rojo de las colonias coliformes. E. coli rompe los dos substratos el Samon-Gal y X-glucorónido, dando lugar a un color de azul oscuro a violeta, fácilmente distinguible del resto de coliformes. La addición de triptófano al medio favorece la realización de la prueba del Indol para la confirmación de E. coli.

UTILIZACIÓN

Conviene dejar que las placas alcancen la temperatura ambiente y que ofrezcan una superficie húmeda pero no mojada para poder efectuar una siembra por agotamiento correcta. Las placas se han de incubar a 37±2 ºC durante 24 horas antes de la lectura de los resultados.

Contar las colonias β-D-galactosidasa (salmón-rojo) como presuntivas coliformes que no son E.coli. Las colonias β-D-galactosidasa y β-D-glucoronidasa (azul oscuro-violeta) son contadas como E.coli. El total de coliformes será la suma de las colonias β-D-galactosidasa positivas (salmón-rojo) y todas las colonias azul oscuro/violeta.

Nota: Algunas cepas de Sighella contienen el enzima β-D-glucoronidasa y pueden crecer dando lugar a colonias azul claro. Las cepas de E.coli β-glucoronidas negativas, como por ejemplo E. coli O157:H7 son incoloras.

Nota: A veces las placas pueden presentar precipitados que no afectan al funcionamiento de las mismas y desaparecen con la incubación.

CONSERVACIÓN

Las placas han de conservarse en la oscuridad y a temperaturas entre 4 y 15 ºC. La caducidad y el número de lote vienen indicados en la base de cada placa individualmente.

CONTROL DE CALIDAD

Respuesta correcta después de una incubación de 24 horas a 37±2 ºC: