Descripción
PRINCIPIO
La tinción de Ziehl–Neelsen se utiliza para la diferenciación de los microorganismos ácido-alcohol resistentes. Estos microorganismos poseen una pared celular lipídica especial, que contiene entre otros ácido micólico, que les permite resistir la decoloración con ácido-alcohol después de la tinción con colorantes básicos como la fucsina y aparecen de color rosa-rojizo, mientras que el resto de los microorganismos se tiñe con el colorante de contraste, habitualmente Azul de Metileno. La coloración clásica requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana. Aparentemente se requieren células intactas para que se manifieste la propiedad de ácido-alcohol resistencia. Se supone que la permeabilidad a través de las membranas intactas puede ser un componente importante del mecanismo involucrado en el fenómeno de resistencia a la decoloración por alcohol ácido indicado.
Aunque el mecanismo de la diferenciación no está plenamente establecido, la metódica está totalmente aceptada como procedimiento diagnóstico de sospecha precoz así como para proporcionar información sobre el número de bacilos presentes en la muestra.
Los microorganismos ácido-alcohol resistentes son básicamente las Micobacterias, aunque existen otros microorganismos que también presentan esta característica como son el género Nocardia y algunos parásitos como Cryptosporidium.
USO PREVISTO
Familia de productos sanitarios para diagnóstico in vitro destinado a demostrar la característica de ácido-alcohol resistencia en ciertas bacterias, como las especies Mycobacteria y Nocardia y los quistes de Cryptosporidium e Isospora utilizando el método diferencial de Ziehl Neelsen.
Son colorantes cualitativos que dan información sobre el estado fi siológico o patológico de la muestra de tejido cuando la tinción obtenida es interpretada por profesional cualificado. Para obtener un diagnóstico, los resultados se han de evaluar en el contexto de los antecedentes médicos, el estado físico y el resto de datos clínicos y de laboratorio obtenidos.
Para uso profesional de laboratorio.
COMPOSICIÓN
Fucsina básica, C.I. 42510 0,2 %.
Fenol 4,6 %.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Los reactivos almacenados a 15-30ºC y protegidos de la luz, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los envases deben mantenerse siempre bien cerrados.
El paso del tiempo y temperaturas inferiores a 15ºC, pueden provocar la aparición de un ligero precipitado en algún reactivo, que no afecta a la funcionalidad del producto.
Se aconseja atemperar el reactivo a 15-30ºC, agitar y filtrar el colorante antes de su uso.
La estabilidad en uso debe ser determinada por cada usuario según su criterio
MATERIAL NO SUMINISTRADO
Material de uso general de laboratorio.
Portaobjetos y cubreobjetos, mechero Bunsen, asa de siembra, soporte de tinción, papel de filtro, microscopio con lente de inmersión.
PRECAUCIONES
Los reactivos se deben manipular con precaución. Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
Cualquier incidente grave relacionado con el producto deberá comunicarse a QCA y a la autoridad competente del estado en el que esté establecido el usuario.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda seguir las prácticas de control de calidad marcadas por los organismos internacionales y realizar tinciones de forma periódica con preparaciones de control de calidad con microorganismos ATCC para este fin.
MUESTRA
Extensiones bacterianas procedentes de diversos fluidos corporales como exudados, fluidos pulmonares, esputos, sedimentos de orina, cultivos bacterianos, etc.
La manipulación de las muestras debe realizarse de acuerdo con los protocolos establecidos en cada laboratorio para la preparación de muestras, siguiendo el estado del arte vigente.
Extender la muestra con un asa en un portaobjetos directamente o mezclando con solución salina para conseguir un frotis uniforme y delgado. Secar al aire y fijar con calor pasando el portaobjetos por una pequeña llama entre 2 y 3 veces. Dejar enfriar el portaobjeto antes de realizar la tinción.
Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO
El colorante está listo para su uso.
PROCEDIMIENTO
- Colocar un papel de filtro encima de la preparación y cubrir con Fucsina Fenicada.
Dejar unos 5 – 10 minutos.
Durante este tiempo y, de vez en cuando, calentar hasta que el colorante empiece a emitir vapores. Evitar que la preparación se seque o llegue a hervir.
- Lavar suavemente con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
- Sacar el papel y cubrir con el Decolorante BK, balancear suavemente y a continuación lavar con agua. Si sigue apareciendo coloración rojiza en la muestra repetir la decoloración.
- Lavar suavemente con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
- Cubrir la preparación con Azul de Metileno durante 1 minuto.
- Lavar con agua corriente y secar al aire.
- Examinar al microscopio con objetivo de inmersión.
Cada usuario debe validar este procedimiento en su laboratorio para ajustarlo a su metódica estándar, aplicando las diversas variantes de este procedimiento, tanto manual como automático, que le permita optimizar los resultados. Se debe tener en cuenta que la intensidad de la coloración es proporcional al tiempo de tinción.
RESULTADOS
Bacilos ácido-alcohol resistentes: rojo oscuro a rosa.
Bacilos no ácido-alcohol resistentes: azul.
NOTAS
El resultado de la tinción es orientativo. Una tinción positiva ofrece evidencia presuntiva de la presencia de micobacterias en la muestra y debe confirmarse con pruebas adicionales (cultivo, pruebas moleculares,etc.). Una tinción negativa no indica necesariamente que la muestra sea negativa en cultivo para micobacterias.
El paso crítico de este proceso de tinción es el paso de decoloración, que puede verse influido por el grosor del frotis de la muestra. El tiempo de decoloración ha de determinarse con precisión ya que de lo contrario pueden producirse resultados falsos negativos.
Si se usa agua corriente para el lavado, tener presente que aguas intensamente cloradas pueden debilitar la coloración de contraste. Un lavado excesivo después de la Fucsina puede producir falsos negativos. Un exceso de lavado después de utilizar el colorante de contraste puede disminuir la coloración de los microorganismos no ácido-alcohol resistentes.
CONTIENE
1 x 500 ml
PRO4-9_BKZN_9
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