Descripción
PRINCIPIO
Las Micobacterias son microorganismos ácido-alcohol resistentes, poseen una pared celular lipídica especial, que contiene entre otros ácido micólico, que les permite resistir la decoloración con ácido-alcohol después de la tinción con colorantes básicos como la fucsina y aparecen de color rosa-rojizo, mientras que el resto de los microorganismos se tiñe con el colorante de contraste, habitualmente Azul de Metileno.
La técnica para le detección de microorganismos ácido alcohol resistentes por fluorescencia es similar a la tinción clásica de Ziehl cambiando la Fucsina fenicada por un colorante fluorescente adicionado de fenol, en este caso la Auramina-Rodamina según la técnica de Truant. La Auramina-Rodamina se une a los ácidos micólicos de la pared y el colorante libre es eliminado mediante el lavado con el decolorante ácido. El colorante de contraste, Permanganato Potásico o Rojo de Tiazina, elimina la fluorescencia de fondo inespecífica.
Respecto a las tinciones clásicas, la tinción fluorescente aporta la ventaja de una mayor visibilidad de los microorganismos fluorescentes sobre un fondo oscuro, facilitando el trabajar con objetivos de menor aumento, lo que incrementa el campo de visión y disminuye el tiempo necesario para evaluar la preparación.
USO PREVISTO
Familia de productos sanitarios para diagnóstico in vitro destinado a demostrar la característica de ácido-alcohol resistencia en ciertas bacterias, como las especies Mycobacteria y Nocardia y los quistes de Cryptosporidium e Isospora utilizando el método fluorescente de auramina morse.
Son colorantes cualitativos que dan información sobre el estado fisiológico o patológico de la muestra de tejido cuando la tinción obtenida es interpretada por profesional cualificado. Para obtener un diagnóstico, los resultados se han de evaluar en el contexto de los antecedentes médicos, el estado físico y el resto de datos clínicos y de laboratorio obtenidos.
Para uso profesional de laboratorio.
COMPOSICIÓN
Auramina, C.I. 41000 0,2%.
Fenol 0,4 %.
Etanol 25 %.
Glicerina 30 %.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Los reactivos almacenados a 15-30ºC y protegidos de la luz, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los envases deben mantenerse siempre bien cerrados.
El paso del tiempo y temperaturas inferiores a 15ºC, pueden provocar la aparición de un ligero precipitado en algún reactivo, que no afecta a la funcionalidad del producto.
Se aconseja atemperar el reactivo a 15-30ºC, agitar y filtrar el colorante antes de su uso.
La estabilidad en uso debe ser determinada por cada usuario según su criterio.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
Material de uso general de laboratorio.
Portaobjetos y cubreobjetos, mechero Bunsen, asa de siembra, soporte de tinción, microscopio de fluorescencia.
La tinción se puede usar con un método de tinción manual o con equipos automáticos de tinción (consultar teñidores QCA disponibles en la web). Seguir las instrucciones de uso de los equipos automáticos suministradas por el fabricante.
PRECAUCIONES
Los reactivos se deben manipular con precaución. Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
Cualquier incidente grave relacionado con el producto deberá comunicarse a QCA y a la autoridad competente del estado en el que esté establecido el usuario.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda seguir las prácticas de control de calidad marcadas por los organismos internacionales y realizar tinciones de forma periódica con preparaciones de control de calidad con microorganismos ATCC para este fin.
MUESTRA
Extensiones bacterianas procedentes de diversos fluidos corporales como exudados, fluidos pulmonares, esputos, sedimentos de orina, cultivos bacterianos, etc.
La manipulación de las muestras debe realizarse de acuerdo con los protocolos establecidos en cada laboratorio para la preparación de muestras, siguiendo el estado del arte vigente.
Extender la muestra con un asa en un portaobjetos directamente o mezclando con solución salina para conseguir un frotis uniforme y delgado. Secar al aire y fijar con calor pasando el portaobjetos por una pequeña llama entre 2 y 3 veces. Dejar enfriar el portaobjeto antes de realizar la tinción.
Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO
El colorante está listo para su uso, para tinción manual y para su uso en el QCA STAINER.
PROCEDIMIENTO
- Cubrir la preparación con el Reactivo Nº1, Auramina (Morse).
Dejar unos 15 minutos.
- Lavar suavemente con agua corriente.
- Decolorar con Reactivo Nº2, Decolorante MT durante 30-60 segundos.
- Lavar suavemente con agua corriente.
- Cubrir la preparación con Reactivo Nº3, Permanganato Potásico durante unos 2 minutos. También se puede usar Rojo de Tiazina.
- Lavar con agua y secar al aire.
- Examinar la preparación en un microscopio de fluorescencia a un aumento de 25X con un filtro de emisión y absorción adecuados (filtro de absorción 460nm y filtro de emisión 550nm).
Para el QCA STAINER, las distintas metódicas se encuentran en el sofware del sistema.
Cada usuario debe validar este procedimiento en su laboratorio para ajustarlo a su metódica estándar, aplicando las diversas variantes de este procedimiento, tanto manual como automático, que le permita optimizar los resultados. Se debe tener en cuenta que la intensidad de la coloración es proporcional al tiempo de tinción.
RESULTADOS
Bacilos ácido-alcohol resistentes: fluorescencia amarilla verdosa
Fondo: negro con permanganato o rojizo con rojo de tiazina y otras bacterias pueden aparecer ligeramente fluorescentes.
NOTAS
El resultado de la tinción es orientativo. Una tinción positiva ofrece evidencia presuntiva de la presencia de micobacterias en la muestra y debe confirmarse con pruebas adicionales (cultivo, pruebas moleculares,etc.). Una tinción negativa no indica necesariamente que la muestra sea negativa en cultivo para micobacterias.
El paso crítico de este proceso de tinción es el paso de decoloración, que puede verse influido por el grosor del frotis de la muestra. El tiempo de decoloración ha de determinarse con precisión ya que de lo contrario pueden producirse resultados falsos negativos.
Si se usa agua corriente para el lavado, tener presente que aguas intensamente cloradas pueden debilitar la coloración de contraste. Un lavado excesivo después de la Fucsina puede producir falsos negativos. Un exceso de lavado después de utilizar el colorante de contraste puede disminuir la coloración de los microorganismos no ácido-alcohol resistentes.
Se aconseja, una vez detectados los microorganismos fluorescentes, confirmar los resultados con objetivos de mayor aumento (100X). Esta segunda revisión permite distinguir entre partículas fluorescentes no celulares y células bacterianas fluorescentes, que pueden confundirse a bajo aumento.
CONTIENE
6 x 250 ml
PRO4-9_BKAUMOR_9
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