Anti-C+D+E monoclonal, 10 ml

Descripción

RESUMEN

Levine y Stetson descubrieron el sistema Rh del grupo sanguíneo en 1940. Además del D, los principales antígenos Rh son C, E, c y e. El antígeno D es altamente inmunogénico.; los antígenos C y e son menos inmunogénicos que los E y c. Los correspondientes anticuerpos son clínicamente significativos puesto que pueden provocar Reacciones transfusionales, así como el Síndrome hemolítico del Recién Nacido.

USO PREVISTO

El reactivo es un reactivo de agrupación sanguínea destinado a ser utilizado para determinar cualitativamente la presencia o ausencia del antígeno C (RH2) y / o antígeno D (RH1) y / o antígeno E (RH3) en los hematíes de donantes de sangre o pacientes. que requieran una transfusión de sangre cuando se analicen de acuerdo con los procedimientos, técnicas recomendadas que se indican en estas IDU.

PRINCIPIO DEL MÉTODO

El reactivo contiene anticuerpos contra los antígenos C y D y E en los hematíes humanos y provocará la aglutinación directa de los hematíes que contengan el antígeno C y/o D y/o E. La ausencia de aglutinación generalmente es indicativa de la inexistencia de los correspondientes antígenos Rh (ver Limitaciones).

REACTIVOS

Los reactivos Spinreact IgM Monoclonales Anti-Rh son reactivos bajos en proteínas que contienen anticuerpos humanos monoclonales diluidos en cloruro sódico , albúmina bovina y potenciadores macromoleculares (4,0 g%). Los reactivos no contienen ni consisten en sustancias CMR, o sustancias disruptivas endocrinas o que puedan resultar en sensibilización o reacción alérgica por parte del usuario. Cada reactivo es suministrado en la dilución óptima para su utilización en todos los métodos aquí recomendados sin necesidad de diluciones o adiciones suplementarias. Ver el lote y caducidad de cada referencia en la etiqueta del vial.

MS-24 + RUM-1 + MS-258

PRECAUCIONES

1. Los reactivos son sólo para uso en diagnóstico in vitro.
2. Si el vial del reactivo está roto o agrietado, descartar inmediatamente su contenido.
3. No utilizar reactivos caducados. (ver la etiqueta de vial).
4. No utilizar reactivos que presenten precipitados.
5. La manipulación del reactivo debe realizarse con la apropiada indumentaria de protección, tales como guantes desechables y bata de laboratorio.
6. Los reactivos han sido filtrados a través de cápsulas de 0,2 μm para reducir la carga biológica pero no son suministrados estériles. Una vez abierto el vial, el contenido debe permanecer viable hasta la fecha de caducidad, siempre y cuando no haya una marcada turbidez la cual podría ser indicativa de deterioración o contaminación del reactivo.
7. Los reactivos contienen < 0,1% de azida sódica. La azida sódica puede ser tóxica, si se ingiere y puede reaccionar con cobre o plomo de las tuberías y formar azidas metálicas explosivas. En caso de eliminación del producto, hacerlo con abundante agua del grifo.
8. Los materiales utilizados en la producción de los productos fueron analizados en origen mediante tests microbiológicos aprobados y resultaron ser negativos para anticuerpos contra VIH 1+2 y VHC, y para el antígeno HBs.
9. Ningún método puede garantizar que los productos derivados de fuentes humanas o animales están libres de enfermedades infecciosas. Manipular y desechar con precaución los viales y su contenido.
10. Para más información sobre la eliminación del producto o descontaminación en caso de derrame, ver las fichas de seguridad.

NOTAS

1. Se recomienda la utilización de un control positivo (idealmente un heterocigoto) y un control negativo para testar de forma paralela en cada lote de tests. Los tests deben considerarse inválidos si los controles no muestran los resultados esperados.
2. Durante el tipado de hematíes de un paciente es importante incluir un control negativo, debido a que los potenciadores macromoleculares del reactivo pueden provocar falsas reacciones positivas con las células recubiertas de IgG.
3. Los antígenos Rhesus débiles pueden ser mal detectados a través de placas de gel, placas microtítulo y porta. Por ello, se recomienda utilizar la técnica en tubo.
4. Antes de usar, dejar que el reactivo alcance la temperatura ambiente. Tan pronto como se haya utilizado el reactivo, almacenarlo de nuevo a 2-8 ºC.
5. En los métodos aquí recomendados, un volumen es aproximadamente 50 μL utilizando el gotero suministrado.
6. La utilización de los reactivos y la interpretación de los resultados deben llevarse a cabo por personal cualificado y formado de acuerdo a los requisitos del país dónde los reactivos están siendo utilizados. El usuario debe determinar la idoneidad de los reactivos para otras técnicas.

CONSERVACIÓN

Los viales de reactivo deben almacenarse a 2-8 ºC al recibirlos. El almacenamiento prolongado a temperaturas fuera de este rango puede resultar en una pérdida acelerada de la reactividad del reactivo. Este reactivo ha sido sometido a estudios de estabilidad en transporte a 37 ºC y -25 ºC como se describe en el documento BS EN ISO 23640:2015.

MATERIAL NECESARIO PERO NO PROPORCIONADO

Método en Tubo

• Tubos de ensayo de vidrio (10×75 mm o 12×75 mm).
• Centrífuga capaz de centrifugar a 1000 g durante 20 segundos.
• Solución de PBS (pH 6,8-7,2) o solución salina isotónica (pH 6,5-7,5).
• Hematíes para control positivo (idealmente R1r) y negativo (idealmente rr).

Método Bio-Rad ID

• Tarjetas Bio·Rad ID·Card (NaCI, prueba enzimática y crioaglutininas).
• Centrífuga Bio-Rad ID-.
• Bio-Rad ID·CellStab o ID-Diluent 2.

Método Ortho BioVue

• Casetes de Ortho BioVue System (neutros).
• Centrífuga Ortho BioVue System.
• Diluyente de hematíes Ortho 0.8% Red Cell Diluent.

Método de placa mictrotituladora

• Placas microtituladora de pocillos en «U» validadas.
• Centrífuga de placas microtituladoras.
• Agitador de placas microtituladoras

Método en porta

• Portaobjetos de vidrio para microscopio o cartulinas blancas.
• Palillos aplicadores.
• Cronómetro.

Todos los métodos

• Pipetas volumétricas.

 

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS

Las muestras de sangre se pueden recolectar en EDTA, citrato, anticoagulantes CPDA o como una muestra coagulada. Las muestras deben analizarse lo antes posible después de la recolección. Si se produce un retraso en la prueba, almacene las muestras a 2-8 ºC. Las muestras que presenten hemólisis grave o contaminación microbiana no deben utilizarse para la prueba. Las muestras de sangre que muestran evidencia de lisis pueden dar resultados poco fiables. Es preferible (pero no esencial) lavar todas las muestras de sangre con PBS o solución salina isotónica antes de realizar la prueba.

PROCEDIMIENTOS

Método en Tubo

1. Preparar una suspensión de hematíes al 2-3% en PBS o solución salina isotónica.
2. Añadir en un tubo identificado: 1 volumen de reactivo Anti-Rh y un volumen de la suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000 rcf (g) o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
4. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente en busca de aglutinación.
5. Cualquier tubo que muestre un resultado negativo o cuestionable, debe ser incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente.
6. Tras la incubación, repetir los pasos 3 y 4.

Método Bio-Rad ID (NaCI, prueba enzimática y tarjetas de crioaglutininas)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0,8% en ID-CellStab o ID-Diluent 2.
2. Retirar el papel de aluminio de tantos microtubos como sea necesario.
3. Colocar en un microtubo apropiado: 50 μL de suspensión de hematíes y 25 μL de reactivo Spinreact Anti-Rh.
4. Centrifugar las tarjetas ID-Card en la centrífuga Bio-Rad ID.
5. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método Ortho BioVue (tarjetas neutrales)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0.8% en Ortho 0.8% Red Cell Diluent.
2. Retirar el papel de aluminio de tantas cámaras de reacción como sea necesario.
3. Colocar en la cámara de reacción adecuada: 50 μL de suspensión de hematíes y 40 μL de reactivo Spinreact Anti-Rh.
4. Centrifugar los casetes durante 5 minutos en una centrífuga Ortho BioVue System.
5. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método de placa microtituladora, usando pocillos «U»

1. Preparar una suspensión al 2-3% de hematíes en PBS o solución salina isotónica.
2. Depositar en el pocillo apropiado: 1 volumen de reactivo Anti-Rh y 1 volumen de suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente, preferiblemente usando un agitador de microplacas, cuidando de evitar cualquier contaminación cruzada.
4. Incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos (tiempo en función del usuario).
5. Centrifugar la microplaca durante 1 minuto a 140 rcf o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
6. Resuspender el botón celular mediante una agitación cuidadosamente controlada en un agitador de microplacas.
7. Leer macroscópicamente o con un lector automático validado.
8. Cualquier reacción débil debe ser repetida a través del método en tubo.

Método en Porta

1. Preparar una suspensión de hematíes al 35-45 % en suero, plasma, PBS o solución salina isotónica. Si no es posible, también se puede usar sangre entera con anticoagulante.
2. Depositar en un porta o en una tarjeta identificados: 1 volumen del reactivo Anti-Rh y 1 volumen de la suspensión de hematíes.
3. Utilizando un palillo aplicador limpio, mezclar el reactivo y las células en un área de unos 20×40 mm.
4. Inclinar lentamente el portaobjetos hacia adelante y hacia atrás durante 1 minuto , manteniendo el porta a temperatura ambiente.
5. Leer macroscópicamente tras 1 minuto sobre una luz difusa y no confundir las fibras de fibrina con aglutinación.
6. Cualquier reacción débil debe ser repetida con el método en tubo.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Positivo: La aglutinación de hematíes constituye un resultado positivo y, dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la presencia del antígeno Rh correspondiente en los hematíes.

Negativo: La ausencia de aglutinación de hematíes constituye un resultado negativo y, dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la ausencia del antígeno Rh correspondiente en los hematíes.

Control: los resultados de células que aglutinen con el control negativo deben excluirse, puesto que la aglutinación es probablemente causada por el efecto de los potenciadores macromoleculares del reactivo en células sensibilizadas.

ESTABILIDAD DE LAS REACCIONES

1. Leer los tests realizados en microplacas y tubos inmediatamente tras la centrifugación.
2. Los tests en porta deben ser interpretados en un minuto a fin de asegurar la especificidad y evitar la posibilidad de que un resultado negativo sea incorrectamente interpretado como positivo debido al secado del reactivo.
3. Los resultados, de tests realizados a otras temperaturas de las aquí recomendadas, deben ser interpretados con cautela.

LIMITACIONES

Los reactivos Spinreact Anti-Rh no son adecuados para su utilización con células tratadas enzimáticamente o para el uso en técnicas indirectas antiglobulina.

Algunos hematíes expresan variantes de antígeno Rh, pudiendo dar lugar a reacciones más débiles de las observadas en células control positivas seleccionadas aleatoriamente. Anti-C pude generar reacciones más débiles con el antígeno C de individuos R₂R_Z. De forma parecida, Anti-e puede provocar reacciones algo más débiles en ausencia de antígeno C, ej. R₂r, r»r y rr.

La supresión o disminución de la expresión de ciertos antígenos de grupos sanguíneos puede, por el contrario, dar lugar a falsas reacciones negativas. Por estos motivos, la asignación de genotipos, en base a los resultados del test, debe siempre realizarse con cautela.

Los falsos resultados negativos también pueden deberse a:

• Contaminación de los materiales del test.
• Conservación, concentración celular, tiempo o temperatura de incubación inadecuadas.
• Centrifugación inapropiada o excesiva.
• Desviación de los métodos recomendados

El usuario es responsable del funcionamiento de los reactivos en cualquier otro método distinto de los mencionados en los procedimientos.

Cualquier desviación de los procedimientos aquí recomendados debería ser validada antes de su utilización.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

Previamente a su liberación, cada lote de este reactivo es testado usando los métodos listados en estas IDU. Las pruebas cumplieron con los requisitos establecidos en la versión/edición actual de las «Directrices para los servicios de transfusión de sangre en el Reino Unido» y las «Especificaciones técnicas comunes».

La especificidad en origen de los anticuerpos monoclonales está demostrada frente a un panel de hematíes antígenos-negativo.

El Control de Calidad de los reactivos se realizó utilizando hematíes con fenotipos que fueron verificados por un centro de transfusión de sangre del Reino Unido y habían sido lavados con PBS o solución salina isotónica antes de su uso.

CONTIENE

1×10 ml

GSIS06-E 15/11/21