Anti-c monoclonal, 5 ml

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PRECAUCIONES

Los reactivos son sólo para uso en diagnóstico in vitro.

Si el vial del reactivo está roto o tiene una fuga, descartar inmediatamente su contenido.

No utilizar reactivos caducados. (ver la etiqueta de vial).

No utilizar reactivos que presenten precipitados.

La manipulación del reactivo debe realizarse con la apropiada indumentaria de protección, tales como guantes desechables y bata de laboratorio.

Los reactivos han sido filtrados a través de cápsulas de 0,2 μm para reducir la carga biológica, pero no son suministrados estériles. Una vez abierto el vial, el contenido debe permanecer viable hasta la fecha de caducidad, siempre y cuando no haya una marcada turbidez la cual podría ser indicativa de deterioración o contaminación del reactivo.

Los reactivos contienen <0,1% de azida sódica. La azida sódica puede ser tóxica, si se ingiere y puede reaccionar con cobre o plomo de las tuberías y formar azidas metálicas explosivas. En caso de eliminación del producto, hacerlo con abundante agua del grifo.

Los materiales utilizados en la producción de los productos fueron analizados en origen mediante tests microbiológicos aprobados y resultaron ser negativos para anticuerpos contra VIH 1+2 y VHC, y para el antígeno HBs.

Ningún método puede garantizar que los productos derivados de fuentes humanas o animales están libres de enfermedades infecciosas. Manipular y desechar con precaución los viales y su contenido.

Para mayor información sobre la eliminación del producto o descontaminación en caso de derrame, ver las fichas de seguridad.

NOTAS

1. Se recomienda la utilización de un control positivo (idealmente heterocigoto) y un control negativo para testar de forma paralela en cada lote de tests. Los tests deben considerarse inválidos si los controles no muestran los resultados esperados.
2. Al analizar hematíes de pacientes que se sabe o se sospecha que tienen autoanticuerpos, anomalías proteicas o una prueba de antiglobulina directa (DAT) positiva, es importante que se teste un control negativo de reactivo en paralelo.
3. Los antígenos Rhesus débiles pueden ser mal detectados mediante los métodos de placas de gel, placas microtítulo y porta. Por ello, se recomienda utilizar el método en tubo.
4. Antes de usar, dejar que el reactivo alcance la temperatura ambiente. Tan pronto como se haya utilizado el reactivo, almacenarlo de nuevo a 2-8 ºC.
5. En los procedimientos aquí recomendados un volumen es aproximadamente 50 μL utilizando el gotero suministrado.
6. La utilización de los reactivos y la interpretación de los resultados deben llevarse a cabo por personal cualificado y formado de acuerdo a los requisitos del país dónde los reactivos están siendo utilizados. El usuario debe determinar la idoneidad de los reactivos para otras técnicas.

CONSERVACIÓN

Los viales de reactivo deben almacenarse a 2-8 ºC al recibirlos. El almacenamiento prolongado a temperaturas fuera de este rango puede resultar en una pérdida acelerada de la reactividad del reactivo. Este reactivo ha sido sometido a estudios de estabilidad en transporte a 37 ºC y -25 ºC como se describe en el documento BS EN ISO 23640:2015.

MATERIAL NECESARIO

Método en Tubo

• Tubos de ensayo de vidrio (10×75 mm o 12×75 mm).
• Centrífuga capaz de centrifugar a 1.000 g durante 20 segundos.
• Solución de PBS (pH 6,8-7,2) o solución salina isotónica (pH 6,5-7,5).
• Hematíes para control positivo y negativo (idealmente rr).
  • Anti C Monoclonal: R1r (control positivo) y rr (control negativo).
  • Anti-E Monoclonal: R2r (control positivo) y rr (control negativo).
  • Anti-c Monoclonal: R1r (control positivo) y R1R1 (control negativo).
  • Anti-e Monoclonal: R2r (positive control) y R2R2 (control negativo).

Método Bio-Rad ID

• Tarjetas Bio·Rad ID·Card (NaCI, prueba enzimática y crioaglutininas).
• Centrífuga Bio-Rad ID-.
• Bio-Rad ID·CellStab o ID-Diluent 2.

Método Ortho BioVue

• Casetes de Ortho BioVue System (neutros).
• Centrífuga Ortho BioVue System.
• Diluyente de hematíes Ortho 0.8 % Red Cell Diluent.

Método de placa mictrotituladora

• Placas microtituladora de pocillos en «U» validadas.
• Centrífuga de placas microtituladoras.
• Agitador de placas microtituladoras

Método en porta

• Portaobjetos de vidrio para microscopio o cartulinas blancas.
• Palillos aplicadores.
• Cronómetro.

Todos los métodos

• Pipetas volumétricas

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS

Las muestras de sangre se pueden recolectar en EDTA, citrato, anticoagulantes CPDA o como una muestra coagulada. Las muestras deben analizarse lo antes posible después de la recolección. Si se produce un retraso en la prueba, almacene las muestras a 2-8 ºC. Las muestras que presenten hemólisis grave o contaminación microbiana no deben utilizarse para la prueba. Las muestras de sangre que muestran evidencia de lisis pueden dar resultados poco fiables. Es preferible (pero no esencial) lavar todas las muestras de sangre con PBS o solución salina isotónica antes de realizar la prueba.

PROCEDIMIENTOS

Método en Tubo

1. Preparar una suspensión de hematíes al 2-3 % en PBS o solución salina isotónica.
2. Añadir en un tubo identificado: 1 volumen de reactivo Anti-Rh y un volumen de la suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000 rcf o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
4. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente en busca de aglutinación.
5. Cualquier tubo que muestre un resultado negativo o cuestionable, debe ser incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente.
6. Tras la incubación, repetir los pasos 3 y 4.

Método Bio-Rad ID (NaCI, prueba enzimática y tarjetas de crioaglutininas)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0,8 % en ID-CellStab o ID-Diluent 2.
2. Retirar el papel de aluminio de tantos microtubos como sea necesario.
3. Colocar en un microtubo apropiado: 50 μL de suspensión de hematíes y 25 μL de reactivo Spinreact Anti-Rh.
4. Centrifugar las tarjetas ID-Card en la centrífuga Bio-Rad ID.
5. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método Ortho BioVue (cassettes neutros)

1. Preparar una suspensión de hematíes al 0,8 % en Ortho 0.8 % Red Cell Diluent. 2.
2. Retirar el papel de aluminio de tantas cámaras de reacción de los cassettes neutros como sea necesario.
3. Colocar en la cámara de reacción adecuada: 50 μL de suspensión de hematíes y 40 μL de reactivo Spinreact Anti-Rh.
4. Centrifugar los cassettes durante 5 minutos en una centrífuga Ortho BioVue System.
5. Leer macroscópicamente en busca de aglutinación.

Método de placa microtituladora, usando pocillos «U»

1. Preparar una suspensión al 2-3 % de hematíes en PBS o solución salina isotónica.
2. Depositar en el pocillo apropiado: 1 volumen de reactivo Anti-Rh y 1 volumen de suspensión de hematíes.
3. Mezclar minuciosamente, preferiblemente usando un agitador de microplacas, cuidando de evitar cualquier contaminación cruzada.
4. Incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos (tiempo en función del usuario).
5. Centrifugar la microplaca durante 1 minuto a 140 rcf o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
6. Resuspender los botones celulares mediante una agitación cuidadosamente controlada en un agitador de microplacas.
7. Leer macroscópicamente o con un lector automático validado.
8. Cualquier reacción débil debe ser repetida a través del método en tubo.

Método en Porta

1. Preparar una suspensión de hematíes al 35-45 % en suero, plasma, PBS o solución salina isotónica.
2. Depositar en un porta o cartulina identificados: 1 volumen del reactivo Anti-Rh y 1 volumen de la suspensión de hematíes.
3. Utilizando un palillo aplicador limpio, mezclar el reactivo y las células en un área de unos 20×40 mm.
4. Lentamente inclinar el porta hacia adelante y hacia atrás durante 30 segundos, ocasionalmente con un periodo adicional de mezcla de 2 minutos, manteniendo el porta a temperatura ambiente.
5. Leer macroscópicamente tras 2 minutos sobre una luz difusa y no confundir las fibras de fibrina con la aglutinación.
6. Cualquier reacción débil debe ser repetida con la técnica en tubo.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Positivo: La aglutinación de los hematíes constituye un resultado positivo y, dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la presencia del antígeno Rh correspondiente en los hematíes.

Negativo: La ausencia de aglutinación de los hematíes constituye un resultado negativo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la ausencia del antígeno Rh apropiado en los hematíes testados.

Los resultados de células que aglutinen con el control negativo deben excluirse, puesto que la aglutinación es probablemente causada por el efecto de los potenciadores macromoleculares del reactivo en células sensibilizadas.

ESTABILIDAD DE LAS REACCIONES

Leer los tests realizados en microplacas y tubos directamente tras la centrifugación.

Los tests en porta deben ser interpretados en 2 minutos a fin de asegurar la especificidad y evitar la posibilidad de que un resultado negativo sea incorrectamente interpretado como positivo debido al secado del reactivo.

Los resultados de tests realizados a temperaturas diferentes de las aquí recomendadas, deben ser interpretados con cautela.

LIMITACIONES

Los reactivos Spinreact Anti-Rh no son adecuados para su utilización con células tratadas enzimáticamente o para el uso en métodos de antiglobulina indirectos.

Algunos hematíes expresan variantes de antígeno Rh, pudiendo dar lugar a reacciones más débiles de las observadas en células control positivas seleccionadas aleatoriamente. Anti-C pude generar reacciones más débiles con el antígeno C de individuos R₂R_Z. De forma parecida, Anti-e puede provocar reacciones sensiblemente más débiles en ausencia de antígeno C, ej. R₂r, r»r y rr.

La supresión o disminución de la expresión de ciertos antígenos de grupos sanguíneos puede dar lugar a falsas reacciones negativas. Por estos motivos, la asignación de genotipos en base a los resultados del test debe siempre realizarse con cautela.

La ocurrencia de falsos positivos o falsos negativos también puede deberse a:

• Contaminación de los materiales del test.
• Conservación, concentración celular, tiempo o temperatura de incubación inadecuados.
• Centrifugación inapropiada o excesiva.
• Desviación de los procedimientos recomendados.

El usuario es responsable del funcionamiento de los reactivos en cualquier otro método distinto de los mencionados en los procedimientos.

Cualquier desviación de los procedimientos recomendados debería ser validada antes de su utilización.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

Previamente a su liberación, cada lote de este reactivo es testado usando los métodos recomendados en estas IDU. Las pruebas cumplieron con los requisitos establecidos en la versión/edición actual de las «Directrices para los servicios de transfusión de sangre en el Reino Unido» y las «Especificaciones técnicas comunes».

La especificidad en origen de los anticuerpos monoclonales está demostrada frente a un panel de hematíes antígeno-negativos.

El Control de Calidad de los reactivos se realizó utilizando hematíes con fenotipos que fueron verificados por un centro de transfusión de sangre del Reino Unido y habían sido lavados con PBS o solución salina isotónica antes de su uso.

CONTIENE

1×5 ml

GSIS10-E 15/11/21