Agar TSC, 20 Placas

Descripción

FORMULA TEÓRICA

• Peptona de caseína 15 g/L.
• Peptona de Soja 5 g/L.
• Extracto Carne 5 g/L.
• Extracto Levadura 5 g/L.
• Metabisulfito sódico 1 g/L.
• Citrato férrico amónico 1 g/L.
• D-Cicloserina 0.4 g/L.
• Agar bacteriológico 15 g/L.
• pH 7.6 ± 0,2.

DESCRIPCIÓN Y USOS

Este medio, formulado con una alta carga nutricional, favorece el crecimiento de gérmenes fastidiosos. Es un conjunto de modificaciones del medio TSN de Marshall, Steenbergen y McClung, substituyendo la mezcla de polimixina y neomicina por la cicloserina y del medio SPS porque está demostrado que las cepas de Clostridium son más resistentes a la cicloserina que a la sulfadiazina.

Formulado inicialmente por Harmonn para quantificación de Clostridium en muestras de alimentos y aguas, y modificado por Shahidi y Ferguson, está basado en la tolerancia al sulfito por su capacidad de reducirlo de determinadas especies de Clostridium; la concentración de sulfito es reducida para facilitar crecimiento de gérmenes de este tipo sensibles y con suma importancia en caso de ser detectados en alimentos. La reducción del sulfito conllevará la formación de un precipitado oscuro que pigmenta las colonias, con el sulfhídrico y el hierro aportado por el citrato férrico amoniacal.

Las condiciones de incubación adecuadas para este medio de cultivo son: a 37±2ºC durante 48 horas y anaerobiosis. No obstante hay que tener en cuenta la capacidad de crecimiento a 42ºC que actúa como factor complementario de identificación presuntiva del Clostridium perfringens. La incorporación de inhibidores como la cicloserina, permite lograr la inhibición de otros gérmenes tolerantes y reductores del sulfito, que pudieran hallarse en la muestra sometida a estudio. La atmósfera de incubación, en anaerobiosis, permitirá complementar la selección de estos gérmenes. Existen ya, como es este medio, modificaciones en las que se suprime la emulsión de yema de huevo, presente en los primeros medios para Clostridium, basados en la detección de su capacidad lecitinasa. Su inclusión no mejoraría la reacción de lecitinasa y en cambio sí disminuiría la visibilidad de las colonias. Este medio está recomendado por la CeNAN para el aislamiento e identificación presuntiva de Clostridium perfringens.

UTILIZACIÓN

Es recomendable que las placas, los tubos alcancen la temperatura ambiente antes de su utilización. La superfície del medio debe aparecer húmeda sin exceso de agua de condensación. Sembrar por estriación hasta agotamiento con asa de platino la muestra directamente o un inóculo de un caldo de enriquecimiento (Wilkins-Chalgren, Tioglicolato). Incubar a 37± 2ºC durante 48 horas en atmósfera anaerobia, antes de la lectura de crecimientos. Los frascos han de licuarse.

CONSERVACIÓN

El medio preparado debe conservarse en refrigeración, entre 4 y 15 ºC, evitando excesivos choques térmicos y con circulación de aire en la nevera, para evitar hemolizaciones. La fecha de caducidad y el número de lote están rotulados en las base de cada placa, en cada tubo y en cada frasco individualmente.

CONTROL DE CALIDAD

Respuesta típica después de una incubación de 48 horas a 37±2 ºC en atmósfera anaerobia: